- 基础
- 技术
- 材料
- 金油紫红色品的制备
- 酸醇的制备
- 亚甲蓝对比染料的制备
- 金you染色技术
- 诺卡氏菌的特殊Kinyoun技术
- Didier改进的Carbol Fuchsin和三色结合技术
- 质量检查
- Kinyoun技术与Ziehl-Neelsen技术相比
- 参考
所述Kinyoun染色是用于染色细菌染色技术和寄生虫耐酸醇。它是通过Ziehl-Neelsen着色的修饰而产生的；两种技术的解释方式相同，但在两个方面有所不同：主要试剂的制备以及Kinyoun技术不使用热量。
由于这个原因，它也被称为冷改性的Ziehl-Neelsen或Kinyoun冷渍。它适用于结核分枝杆菌，麻风分枝杆菌，非典型分枝杆菌，诺卡氏菌，小隐隐孢子虫，小隐隐孢子虫，猫隐隐孢子虫，鼠隐隐孢子虫和cayetanensis的染色。
小隐孢子虫用Kinyoun染色。Punlop Anusonpornperm，来自Wikimedia Commons
值得注意的是，诺卡氏菌在此技术上的染色较弱，因为它们对酸和酒精有部分抵抗力，因此对该属进行了方法上的修改。
反过来，冷Kinyoun技术与Didier改进的三色技术相结合，用于检测球菌（小球隐孢子虫和贝氏孢子）和小孢子孢子（比氏肠小肠虫和小肠脑虫）。
基础
主要的染色试剂是羧甲基紫杉醇或羧甲基紫杉醇，其具有与分枝杆菌和某些寄生虫的富含脂质的蜡状细胞壁（分支杆菌酸）内存在的碳酸的结合特性。
这种键不会被酸性漂白剂所抵消；因此，微生物被定义为耐酸的。
与通过加热使染料固着的Ziehl-Neelsen技术不同，在Kinyoun技术中，此步骤不是必需的，因为为此技术制备的碳化品红溶液中含有高浓度的苯酚。
苯酚会溶解细胞壁中的脂质物质，从而使羧苄青霉素染料进入。染料渗透后，尽管用酸性酒精洗涤，但仍保持固定。
以这种方式，耐酸微生物呈现出特征性的红色，而所有非耐酸微生物则变色并染成蓝色。
技术
材料
-修饰的紫红色品红。
-酒精-酸。
- 亚甲蓝。
金油紫红色品的制备
-基本品红：4克。
-苯酚：8毫升。
-酒精（95％）：20毫升。
-蒸馏水：100毫升。
碱性品红应缓慢溶解在酒精中，并不断混合。随后，将结晶的苯酚在56°C的水浴中融化。溶解后，将8 ml加入上述制备的品红溶液中。
酸醇的制备
-浓盐酸：3毫升。
-乙醇（95％）：97毫升。
必须对其进行测量，合并和混合。
亚甲蓝对比染料的制备
亚甲蓝：0.3g。
-蒸馏水：100毫升。
称重并溶解。
金you染色技术
1-直接从样本中制备涂片，其中包括痰液，肺液，尿沉渣，脑脊液或粪便等；或从原代培养基中培养的纯菌落中获得的微生物悬液。
2-用热修复涂抹。
3-将涂片放在染色桥上，并盖上准备好的Kinyoun紫红色品红试剂。静置3至5分钟。
4-用蒸馏水洗涤。
5-用酸性酒精漂白3分钟，然后再次用蒸馏水洗涤。
6-再用酸性酒精漂白1或2分钟，直到不再带走着色为止。
7-用蒸馏水洗涤并沥干，将载玻片放在垂直位置。
8-用亚甲基蓝覆盖制剂，并使其作用4分钟。
9-用蒸馏水洗涤，然后风干。
10-以40倍检查，然后以100倍检查。
为了改善和加速耐酸微生物的染色，在30至40毫升的Kinyoun Carbol Fuchsin中加入1滴湿润剂（例如7号Tergitol）。
一些实验室将亚甲蓝对比染料更改为亮绿色或苦味酸。第一个产生绿色背景，第二个产生黄色。
诺卡氏菌的特殊Kinyoun技术
为了改善诺卡氏菌属细菌的染色，使用了Kinyoun染色的修饰。该技术如下：
1-用Kinyoun Carbol品红覆盖涂片3分钟。
2-用蒸馏水洗涤。
3-用3％的制备的酸性酒精短暂脱色，直至不再带色。
4-再次用蒸馏水洗涤。
5-用亚甲基蓝覆盖制剂，并使其作用30秒。
6-用蒸馏水洗涤，然后风干。
Didier改进的Carbol Fuchsin和三色结合技术
建议同时使用该技术分析粪便样品中的球菌和微孢子虫孢子。遵循的步骤如下：
1-用Kinyoun紫红色品红覆盖涂片10分钟。
2-除去着色剂，并用蒸馏水洗涤。
3-用盐酸酒精漂白30秒。
4-再次用蒸馏水洗涤。
5-在37°C下用三色溶液覆盖涂片30分钟。
6-用蒸馏水洗涤。
7-用乙酸酒精漂白10秒。
8-使用95％乙醇将涂片清洗30秒钟。
质量检查
作为阳性对照，准备了结核分枝杆菌菌株的涂片，并用制备的试剂染色，以验证细菌呈现适当的颜色（紫红色）。
也可以使用阴性对照，方法是快速制备除酸性酒精以外的任何菌株的涂片，从而验证整个样品具有对比色。
Kinyoun技术与Ziehl-Neelsen技术相比
Kinyoun技术更简单，因为它省去了加热步骤，但是其主要优点是，从长远来看，它避免了蒸气的散发，剧毒和致癌。因此，Kinyoun染色剂对于染色人员来说更安全。
重要的是要考虑到必须注意试剂不要直接与皮肤接触，因为它们具有腐蚀性并且漂白剂是易燃的。
至于缺点，涂片阴性不一定表示不存在该生物。此外，细胞碎片的存在会导致假阳性，导致诊断混乱。
参考
- 应用临床化学。（2016）。BK Kinyoun套件，可通过以下网址获得：cromakit.es
- Orozco-Rico Miguel。艾滋病毒中有Kinyoun色斑和两个球菌。医学杂志医学博士。2011; 3（2）：137
- 福布斯（Forbes B），萨姆（Sahm D），魏斯菲尔德（Weissfeld）A（2009年）。Bailey&Scott微生物学诊断。12版。阿根廷。社论Panamericana SA
- Koneman E，Allen S，Janda W，Schreckenberger P，Winn W.（2004年）。微生物学诊断。（第5版）。阿根廷，社论Panamericana SA
- 维基百科的贡献者。“金you污渍。” 维基百科，免费百科全书。维基百科，《免费百科全书》，2018年2月8日。网站。2019年1月5日。
- Combol A，FernándezN，Figueredo E，AcuñaA，ZanettaE。同时诊断球菌和微孢子虫的染色技术的实施。共和国大学卫生研究所。蒙得维的亚。乌拉圭。可在以下网站获得：health.edu.uy