- 吉姆萨染色的基础
- 材料
- 准备储备溶液的材料
- 如何准备储备溶液
- 制备缓冲溶液的材料
- 着色剂的最终制备
- 进行着色所需的其他材料
- 技术
- 染色过程
- 实用工具
- 血液学
- 真菌学
- 细菌学
- 寄生虫学
- 细胞学
- 细胞遗传学
- 证明吉姆萨染色效果的研究
- 良好染色的建议
- Giemsa染色的常见错误
- 极蓝色
- 过多的粉红色
- 涂片中有沉淀物存在
- 形态伪影的存在
- 储存方式
- 参考文献
的Giemsa染色是一种类型的着色的临床样品，基于酸性和碱性染料的混合物组成。它的创造灵感来自罗曼诺夫斯基（Romanowsky）所做的工作，来自德国的化学家和细菌学家古斯塔夫·吉姆萨（Gustav Giemsa）通过添加甘油来稳定化合物来完善它。
最初的Romanowsky技术产生的变化可以极大地改善显微观察，因此该技术以Giemsa染色的名称受洗。
各种样品均用Giemsa染色剂染色。外周血伊氏锥虫 B.正常血细胞。C.外周血博氏疏螺旋体。D.伯基特氏淋巴瘤。
由于它是一种执行简单，功能强大且经济的技术，因此目前在临床实验室中广泛用于血液涂片，骨髓样本和组织切片。
Giemsa染色技术对于细胞学研究非常有用，因为它可以观察特定的细胞结构。这项技术可以染色细胞的细胞质，细胞核，核仁，液泡和颗粒，甚至可以区分染色质的细微痕迹。
此外，可以检测到细胞核的大小，形状或颜色的显着变化，从而可以可视化细胞核与细胞质关系的丧失。
另一方面，它可以鉴定骨髓和外周血中的未成熟细胞，对于诊断诸如白血病的严重疾病很重要。还可能检测到血液中的寄生虫，细胞外和细胞内细菌，真菌等。
由于可以研究细胞的有丝分裂，因此在细胞遗传学中被广泛使用。
吉姆萨染色的基础
罗曼诺夫斯基型染料基于使用酸性和碱性染料之间的对比，以分别染色碱性和酸性结构。可以看出，酸性染料对碱性结构有亲和力，反之亦然。
所使用的碱性染料是亚甲基蓝及其氧化衍生物（天蓝色A和天蓝色B），而酸性染料是曙红。
细胞的酸结构是核酸，分段嗜碱性粒细胞的颗粒等，因此它们将被亚甲蓝染色。
同样，细胞的基本结构是血红蛋白和一些颗粒，例如分段嗜酸性粒细胞中所含的颗粒；等等。这些将被曙红染色。
另一方面，由于亚甲基蓝和天蓝色的特征是变色着色剂，因此它们可以根据它们所具有的聚阴离子的负载量为不同的结构提供可变的色调。
这是碱性和酸性染料的战略组合如何根据每种结构的生化特性设法开发出多种颜色的方法，在酸性结构的情况下会穿过浅蓝色，深蓝色，淡紫色和紫色色调。
虽然曙红提供的颜色更稳定，但会在橘红色和鲑鱼之间产生颜色。
材料
准备储备溶液的材料
储备液的制备需要称重600 mg的Giemsa着色粉，测量500 cc不含丙酮的甲醇和50 cc中性甘油。
如何准备储备溶液
将沉重的吉姆萨粉放入研钵中。如果有结块，则应喷洒。随后加入可观量的甘油，并充分混合。将获得的混合物倒入非常干净的琥珀色瓶中。
将其余的甘油放在研钵中。再次混合以清洁粘附在砂浆壁上的其余着色剂，然后倒入同一罐中。
将瓶子盖好，放在55ºC的水浴中2个小时。在水浴中时，每半小时左右轻轻摇动一次混合物。
随后，使混合物冷却以放置醇。以前，将一部分测得的酒精放入研钵中，以完成对剩余着色剂的洗涤，然后将其与其余酒精一起添加到混合物中。
该制剂应至少成熟2周。储备溶液的使用部分应进行过滤。
为避免污染制剂，建议将经常使用的部分转移到带有滴管的琥珀色小瓶中。每次试剂用完时都要重新加注。
制备缓冲溶液的材料
另一方面，pH 7.2的缓冲溶液的制备如下：
称重6.77 g无水磷酸钠（NaHPO 4），2.59 g磷酸二氢钾（KH 2 PO 4）和蒸馏水至1000 cc。
着色剂的最终制备
为了制备最终的染色溶液，测量2 ml的过滤原液，并与6 ml的缓冲液混合。搅拌混合物。
必须考虑的一个相关事实是，着色准备技术可以根据商业公司而改变。
进行着色所需的其他材料
除了上述材料外，您还必须具有色桥，用水或缓冲液进行洗涤的T恤衫，用于物品的载物片或盖，用于控制着色时间的秒表以及使纸张或吸水纸变干的材料（纱布或棉花）。
技术
染色过程
1）在染色之前，必须将样品涂在干净的载玻片上。
样品可以是血液，骨髓，组织学切片或宫颈阴道样品。建议涂抹酱变薄，并在着色前干燥1或2小时。
2）在着色桥上，放置所有需要着色的纸。您始终以相同的顺序工作，并且每张纸都被很好地标识。
3）在涂片上滴几滴100％甲醇（甲醇），使其作用3至5分钟，以固定和脱水样品。
4）丢弃板上的甲醇，然后风干。
5）干燥后，用滴管放置最终的染色溶液，直到覆盖整张纸。离开行动15分钟。一些作者建议最多25分钟。这取决于营业所。
6）排干污渍，并用蒸馏水或7.2缓冲溶液洗涤涂片。
7）在吸水纸上，让纸张在露天下干燥，并在支撑的帮助下垂直放置。
8）用酒精棉签或棉签清洁幻灯片的背面，以除去任何污渍。
实用工具
Giemsa染色技术用于各个领域，包括：血液学，真菌学，细菌学，寄生虫学，细胞学和细胞遗传学。
血液学
这是这种污渍最经常使用的方法。有了它，就可以鉴定出存在于骨髓或外周血样本中的每个细胞。不仅可以估算每个系列的数量，还可以检测白细胞增多症或白细胞减少症，血小板减少症等。
由于它对识别未成熟细胞敏感，因此与急性或慢性白血病的诊断有关。还可以进行贫血的诊断，例如镰状细胞性贫血，镰状细胞等。
真菌学
在这个领域，它通常用于在组织样本中搜索荚膜组织胞浆菌（胞内二形真菌）。
细菌学
在吉姆萨染色的血液涂片中，有可能在患有复发性热病的患者中检测到疏螺旋体。在发烧高峰期采集的样本中，红细胞中的螺旋体丰富。
还可以在感染的细胞中观察细胞内细菌，例如立克次氏菌和沙眼衣原体。
寄生虫学
在寄生虫学领域，吉姆萨染色使诊断疟疾，查加斯病和利什曼病等寄生虫病成为可能。
在前两个中，在感染患者的外周血中分别可见疟原虫和克氏锥虫，根据疾病的阶段，它们可以在不同的阶段被发现。
为了改善对血液中寄生虫的搜索，建议将Giemsa染色剂与May-Grünwald染色剂混合使用。
同样，可以通过评估发现寄生虫的吉姆萨染色的皮肤活检样本来诊断皮肤利什曼病。
细胞学
Giemsa染色也用于宫颈内膜样品的细胞学研究，尽管它不是为此目的最常用的技术。
但是在资源短缺的情况下，可以使用它，它具有与Papanicolaou技术所提供的功能类似的功能，并且成本较低。但是，这需要检查员的专业知识。
细胞遗传学
Giemsa染色的一个相关特征是它能够与富含腺嘌呤和胸腺嘧啶的DNA区域牢固结合。这样可以在细胞有丝分裂期间以不同的凝结状态显示DNA。
这些研究对于检测色差，例如染色体不同区域的重复，缺失或易位是必要的。
证明吉姆萨染色效果的研究
Cannova等人（2016）比较了三种染色技术来诊断皮肤利什曼病。
为此，他们使用了从实验性接种利什曼原虫的实验动物（中型天牛）中获得的样品。
作者证明，吉姆萨（Giemsa）染色优于Pap-mart®和加夫尼（Gaffney）染色。因此，他们认为Giemsa染色剂是诊断皮肤利什曼病的理想工具。
作者获得的出色结果归因于以下事实：构成吉姆萨混合物的染料组合呈现出创造良好对比度的必要条件，从而可以在细胞内和细胞外清楚地分辨出变形虫的结构。
其他技术（Pap-mart®和Gaffney）也做到了，但是方法较弱，因此很难可视化。这就是为什么建议将Giemsa染色剂用于利什曼病的寄生虫学诊断。
同样，Ramírez等人（1994年）的一项研究评估了结膜涂片中Giemsa和Lendrum染色对沙眼衣原体鉴定的有效性。
作者确定Giemsa和Ledrum染色具有相同的特异性，但发现Giemsa更加敏感。
这就解释了为什么Giemsa染色剂是当前最常用于衣原体感染诊断的原因，尤其是在资源很少的情况下。
资料来源：PanReac Applichem ITW试剂。吉姆萨染色。版本2：JMBJUL17 CEIVD10ES。西班牙Castellar delVallés。
良好染色的建议
不应加快纸张的干燥。必须在户外干燥一定时间。大约2小时。
2小时后立即上色以获得最佳效果。
为了使涂片更好地固定和染色，必须将样本分布在载玻片上，以保持薄而均匀的层。
优选的血液样品是毛细管，因为涂片是直接从血液中进行的，因此样品不含任何添加剂，有利于维持细胞结构。
但是，如果使用静脉血，则EDTA应该用作抗凝剂而不是肝素，因为肝素通常会使细胞变形。
Giemsa染色的常见错误
在实践中，可能会犯错误。结构的色调突然变化证明了它们。
极蓝色
可能是由于：
- 涂片很厚
- 超过染色时间
- 洗净不足。
- 使用远高于中性（碱性）pH值的试剂。
在这些条件下，以下结构的颜色会失真，以至于红细胞而不是鲑鱼粉会呈现绿色，必须染成砖红色的嗜酸性粒细胞的颗粒会变成带蓝色或灰色，依此类推。通常音调有偏差。
过多的粉红色
可能是由于：
- 染色时间不足。
- 长时间或过度洗涤。
- 干燥不良。
- 使用强酸性试剂。
在这种特殊情况下，通常会染成蓝色的结构几乎是看不到的，而染成粉红色的结构将具有极大的色相。
例如：红细胞将变成鲜红色或鲜橙色，核染色质将显示淡粉红色，嗜酸性粒料将染成深鲜红色。
涂片中有沉淀物存在
原因可能是：
- 使用肮脏或冲洗不良的胶片。
- 请勿让涂片充分干燥。
- 保留定影液的时间过长。
- 染色结束时洗涤不足。
- 所用着色剂的过滤不充分或没有过滤。
形态伪影的存在
形态伪影可能会出现在涂片中，从而难以可视化和解释存在的结构。这是因为：
- 使用的抗凝剂类型，例如肝素。
- 使用肮脏，变质或油腻的胶片。
储存方式
制备后，必须将染料保持在室温（15-25°C）下，以防止染料沉淀。应将其存放在密闭的琥珀色容器中。
参考文献
- Cannova D，Brito E和SimonsM。染色技术对皮肤利什曼病诊断的评估。Salus。2016; 20（2）：24-29。
- PanReac Applichem ITW试剂。吉姆萨染色。版本2：JMBJUL17 CEIVD10ES。西班牙Castellar delVallés。
- Clark G.《染色程序》（1981年），第四版。威廉姆斯和威尔金斯。
- 应用临床化学。Giemsa染色剂用于体外诊断。发行人：cromakit.es
- RamírezI，MejíaM，Garcíade la Riva J，Hermes F和Grazioso C.Giemsa和Lendrum染色在结膜涂片中用于鉴定沙眼衣原体的有效性。Sanit Panam的Bol。1994年；116（3）：212-216。
- Casas-RincónG.一般真菌学。1994.委内瑞拉中央大学第二版，图书馆版。委内瑞拉加拉加斯。
- “吉姆萨染色。” 维基百科，免费百科全书。2017年9月1日，世界标准时间01:02。2018年12月6日，es.wikipedia.org。