的孢子染色是用于着色形成一些细菌属在不利条件下，当电阻结构的方法; 这些结构对应于一种生存形式。
形成孢子的属很多。然而，主要的是芽孢杆菌和梭状芽胞杆菌。这些属被认为更相关，因为它们具有人类致病菌。
Shaeffer – Fulton或Wirtz-Conklin方法对孢子染色。和tambe（原始上传者），来自Wikimedia Commons
每个芽孢杆菌都可以产生一个孢子。在将制剂染色时，可以在芽孢杆菌内（内生孢子）或在芽孢杆菌外（外生孢子）中发现孢子。使用常规的细菌染色技术（例如革兰氏染色），孢子仍然是无色的。
当前，有几种染色方法能够穿透孢子的厚结构以对其进行染色。这些方法是多种多样的。其中包括Dorner技术，Möeller染色和Shaeffer – Fulton方法（也称为Wirtz-Conklin）。
在提到的所有技术中，Shaeffer-Fulton方法是常规实验室中使用最广泛的方法。它以1930年创造出这种颜色的两位微生物学家的名字命名：Alicia Shaeffer和MacDonald Fulton。但是，该技术有时以1900年代的两位细菌学家的名字命名为Wirtz-Conklin。
基础
孢子壁厚很厚，因此不会被常规污渍弄脏。孢子的复杂组成阻止了大多数着色剂的进入。
如果从外到内研究孢子，则观察到以下几层：首先，有孢子囊，它是由糖蛋白形成的最薄的外层。
接下来是对高温具有抵抗力的角质层，其次是由肽聚糖组成的皮质。后面是保护原生质体的基壁。
孢子是含有15％钙和二吡啶甲酸的脱水结构。因此，大多数孢子染色技术都依靠加热来使染料能够穿透厚的结构。
孢子一旦被染色，就无法去除染料。在Shaeffer – Fulton技术中，孔雀石绿进入营养细胞，并在加热时渗透到内生孢子和外生孢子。
通过用水洗涤，从营养细胞中除去染料。发生这种情况是因为孔雀石绿色染料略带碱性，因此与营养细胞的结合较弱。
相反，它不能脱离孢子，最终用番红花对芽孢杆菌进行复染。此基础对于发生类似情况的其余技术有效。
孢子染色技术
为了进行孢子染色，必须获得要研究的可疑菌株的纯培养物。
将培养物置于极端温度下24小时以刺激微生物形成孢子。为此，可将培养物置于44°C的烤箱或冰箱（8°C）中放置24或48小时。
如果在上述温度下放置的时间过长，则仅会观察到孢子，因为所有孢子都已经离开了芽孢杆菌。
最后，应将几滴无菌生理溶液放在干净的载玻片上。然后取一小部分培养物，并进行细铺。
之后，将其晾干，加热固定，并使用以下一种方法进行染色：
多纳技术
1-在试管中准备孢子形成的微生物在蒸馏水中的浓缩悬浮液，并加入等体积的已过滤的金尤卡宾品红。
2-将试管放在沸水浴中5至10分钟。
3-在干净的载玻片上，将一滴先前的悬浮液与一滴10％的尼古丁水溶液混合，煮沸并过滤。
4-用温和的热量迅速铺开并干燥。
5-用100倍物镜检查（浸没）。
孢子染成红色，细菌细胞在深灰色背景下几乎变为无色。
改良的多纳技术
1-将形成孢子的微生物的悬浮液铺在载玻片上并在热中固定。
2-样品用滤纸条覆盖，并在其中添加了紫红色品红。用本生灯的火焰将着色剂加热5至7分钟，直到产生蒸汽为止。然后取出纸张。
3-将制剂用水洗涤，然后用吸收纸干燥。
4-用10％的尼古丁薄膜覆盖涂片，使用第二张幻灯片将尼古丁或针头铺开。
孢子和细菌的着色与现有技术中描述的相同。
Shaeffer – Fulton或Wirtz-Conklin技术
1-在玻片上用孢子形成的悬浮液进行细微的涂片并固定加热。
2-用5％的孔雀石绿水溶液覆盖玻片（可以在玻片上放一张滤纸）。
3-在本生灯燃烧器的火焰上加热以释放蒸气并清除火焰。重复操作6至10分钟。如果在操作过程中孔雀石绿溶液蒸发过多，则可以添加更多。
4-取下滤纸（如果已安装）并用水冲洗。
5-用0.5％的番红素水溶液覆盖玻片30秒钟（该技术的某些变体使用0.1％的番红素水溶液并将其放置3分钟）。
通过这种技术，孢子呈现绿色，而杆菌红色。
其缺点是年轻培养物的内生孢子不能很好地染色，因为它们看起来非常透明或无色。为避免这种情况，建议使用48小时的培养液。
莫勒技术
1-用氯仿覆盖涂片2分钟。
2-丢弃氯仿。
3-用5％铬酸覆盖5分钟。
4-用蒸馏水洗涤
5-床单上覆盖有紫红色的品红-fenicada，并暴露于本生灯的火焰中，直到产生蒸气为止；然后将其从火焰中移出片刻。重复该操作，直到完成10分钟为止。
6-用水冲洗。
7-使用酸化的乙醇（盐酸醇）使其变色。放置20或30秒。
8-用蒸馏水洗涤。
9-用亚甲蓝覆盖5分钟，以保持对比。
10-用蒸馏水洗涤。
11-让其干燥，然后将样品移至显微镜。
孢子呈红色，杆菌呈蓝色。重要的是不要吸入蒸气，因为蒸气有毒，从长远来看会致癌。
改良的Möeller技术，无需加热
在2007年，Hayama和他的合作者对Möeller技术进行了修改。他们取消了加热染料的步骤，并通过每10毫升紫杉醇-甲醇溶液添加2滴表面活性剂Tergitol 7来代替它。获得了相同的结果。
应用领域
孢子的着色为病原体的鉴定提供了非常有价值和有用的信息，因为它的存在，其形状，在杆菌内的位置以及使营养细胞变形的能力都是可以指导该物种的数据。涉及某种流派
在这种情况下，值得一提的是，孢子可以是圆形或椭圆形的，它们可以位于中心，也可以位于中央，次要或终端位置。
内生孢子和外生孢子的形状和位置示意图
例子
-艰难梭菌在末端位置形成椭圆形的孢子，使芽孢杆菌变形。
-梭状芽胞杆菌的孢子是椭圆形的，不会使杆菌变形，并且位于末端水平。
-破伤风梭状芽孢杆菌的内生孢子末端，使芽孢杆菌变形，鼓槌状外观。
-肉毒梭菌，组织溶梭状芽孢杆菌，新月形梭状芽孢杆菌和败血梭状芽孢杆菌的孢子为圆形或亚末端椭圆形，并使杆菌变形。
-梭状芽孢杆菌的内生孢子位于中央位置，稍有变形。
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参考文献
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