的染色胶囊是差分染色技术,其具有应力多糖结构的周围某些细菌和酵母称为胶囊的特性。它在临床实验室中用于帮助诊断由包膜微生物引起的某些病理。
它也用于教学实验室,以向健康科学职业的学生演示这种形态结构,例如:医学,生物分析,护理或细胞技术等。
肺炎克雷伯菌涂片涂有胶囊污渍。番红花的印度墨水法。资料来源:А.А.В
有几种简单的技术可以证明胶囊在拥有它的微生物中的存在,它们是:阴性染色,安东尼染色和结合了前两者的变体。
当怀疑存在新型酵母隐球菌时,阴性染色主要用于CSF样品。该酵母菌是脑膜炎的常见病因。
这项技术使用黑果胶或印度墨水,其基础是在制剂背景与微生物的不可渗透胶囊之间形成对比。背景变暗,胶囊无色。这样,就揭示了这种结构。
关于安东尼技术,可以说它主要用于教学实验室,以证明细菌如肺炎克雷伯菌,肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟氏菌中的多糖结构。
这种技术用于诊断目的非常少见,因为还有其他常规测试可以识别这些微生物。
基础
该胶囊是多糖性质的强结构。这保护了微生物免于吞噬作用,因此是难以渗透的结构。
这就是为什么胶囊污渍是基于对比度的原因。着色剂使制剂的底部染色,而胶囊保持无色。
因此,利用这些技术,容易识别胶囊。如果微生物没有胶囊,则无法通过这种类型的着色来区分,因为所有事物都将被染色为相同的颜色。
尽管使用了不同的染料和程序,但用于为胶囊着色的所有技术都具有相同的原理。
技术水平
-安东尼染色
安东尼的污渍使用结晶紫作为污渍。这会将细菌的身体和背景染成紫色。
另一方面,使用20%的硫酸铜。这可以用作洗涤液,也就是说,它可以从制剂中去除多余的紫罗兰色晶体,使胶囊变得透明,但不会使细菌或背景变色。
材料
-虹彩牛奶。
-滑
-1%紫水晶。
-20%硫酸铜。
-光学显微镜。
-浸油。
处理
该技术包括:
- 在虹彩牛奶中培养微生物36小时。
- 将一滴培养物放在幻灯片的末端,然后在旁边放置一滴紫罗兰色玻璃杯,与另一张幻灯片的末端混合并铺开。
- 空气干燥,不要加热。
- 用20%硫酸铜溶液洗涤,风干。
- 在带有浸没物镜的显微镜下观察。搜索蔓延的尽头。
重要的是不要使用热量来固定或干燥,因为这会损坏胶囊。也不要用水冲洗。
解释
虹彩牛奶是一种极好的培养基,因为它为微生物提供了形成显着胶囊的必要营养。
另一方面,呈虹彩的乳汁将形成厚而致密的底部,与细菌体一起被染成紫色,但是包围微生物的胶囊将保持无色。因此,在细菌体周围观察到清晰的光晕。
显微镜下观察用安东尼氏染色的肺炎克雷伯菌涂片的图形表示。资料来源:作者MSc。Marielsa Gil。
优点
这是一种简单的执行技术。不需要修复。
另外,应当注意,可以使用其他培养基,但是优选牛奶培养基,因为其具有提供更显着的胶囊的优点。
缺点
与负染色相比,它是一种劳动强度更大的技术,其可视化要求等待制剂完全干燥。
-负染色
材料
-幻灯片。
-具有微生物的培养基。
-中国墨水或尼古丁。
-光学显微镜。
-生理盐水溶液。
处理
在盖玻片上滴一滴生理盐水,并溶解一小部分微生物培养物。重要的是制剂不要太稠。然后放一滴中国墨水或尼古丁并混合。
然后将盖玻片放在制剂上,而不会使液体溢出。首先在10倍物镜上聚焦,然后移至40倍,在显微镜下对其进行观察。
此技术也可以直接用于CSF样本。即,代替放置一滴微生物培养物,而是放置一滴CSF。
优点
这是一种简单的执行方法,同时又很便宜。它不需要固定或干燥制剂。
缺点
缺点是在干燥之前必须在显微镜下观察,因为如果发生这种情况,微生物将收缩,这将使可视化变得困难。
另一方面,如果分析人员没有经验,则可能会发生假阳性,因为白细胞通常会与酵母菌混淆。
在用培养物证明之前,用中国墨水或黑素菌素技术观察酵母胶囊应被认为是新型隐球菌的诊断诊断。
这是因为存在其他可能导致脑膜炎的酵母,而不仅仅是新隐球菌,例如念珠菌和红球菌属的酵母,以及其他隐球菌。
解释
如果存在被包囊的微生物,则将观察到深色背景,透明物体漂浮在液体中,突出了胶囊的存在。
新型隐球菌胶囊用中国墨水染色。来源:图片来源:内容提供者:CDC / Dr. 利安·海莉
-印度墨水技术
该技术也可以用尼古丁完成。它是先前说明的技术的组合。该技术使用结晶紫和印度墨水或尼古丁。
细菌的身体从带电的紫水晶变成紫色,因为它带负电,而黑果皂苷则使涂片的底部变色。如果细菌具有胶囊,它将在微生物周围显示为透明的光环。
结晶紫可以用以下任何一种颜色代替:藏红素,碱性品红或亚甲基蓝。
材料
-紫罗兰色的玻璃杯。
-尼古丁或印度墨水。
-幻灯片。
-显微镜。
处理
-在培养基中培养微生物。
-将一滴培养物放在幻灯片的末端,然后在旁边放置一滴印度墨水或尼古丁晶体,与另一张幻灯片的末端混合并铺开。
-空气干燥,请勿加热。
-用紫罗兰色晶体溶液覆盖1分钟,然后用蒸馏水冲洗,但要非常小心(柔和的喷射),使其在户外干燥。
-用浸没物镜在显微镜下观察。搜索蔓延的尽头。
解释
会看到紫色的细菌体和深色的背景。如果存在胶囊,则在细菌周围将无色。
参考文献
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