该凝固酶试验是用于揭示所述酶的凝固酶的存在的实验室技术。该酶具有凝结血浆的特性。勒布(Loeb)在1903年首次描述了这种酶。
该测试是在革兰氏阳性,过氧化氢酶阳性球菌上进行的,这使得金黄色葡萄球菌菌株与其他葡萄球菌有所区别,因为它是唯一具有临床意义的微生物。
这两个图像均显示阳性凝固酶测试。来源:左图:Philippinjl。右图:作者MSc拍摄的照片。Marielsa Gil。
从这个意义上说,葡萄球菌科测试为阴性的成员通常被称为凝固酶阴性葡萄球菌。
除了金黄色葡萄球菌以外,还有其他一些可以产生凝结酶的菌株,例如葡萄球菌schleiferi spp凝聚株,hy.us。,中间链球菌和delphini。
但是,前三个在兽医学上具有临床重要性,很少被发现为人类感染的致病因子,而S. delphini仅在海洋环境中被发现。
此外,它们很容易区分,因为hy.us.和S. intermedius不会发酵甘露醇,schleiferi spp凝聚物不会发酵麦芽糖或海藻糖,而金黄色葡萄球菌却会发酵这些碳水化合物。
凝固酶的存在与菌株的毒力有关。但是,该理论已经瓦解,因为观察到其他能够产生重大感染的强力凝固酶阴性物种。
基础
解释
5-20秒内凝集(强阳性试验)。
在20秒到1分钟之间发生可变的凝集(延迟阳性测试)。
一分钟后出现一定程度的凝集(证据不充分)。建议重复测试或通过试管法确认。
没有凝集(阴性测试)。
SSF结果。它必须始终为负,如果自动为正,则测试结果无效。
-管凝血酶测试
材料
-无菌试管
-等离子体
-玛丽浴在37°C。
技术
用无菌移液管吸取0.5 ml血浆至12 x 75试管中,在铂环中装入2至4个纯菌落,从固体培养物中研究18至24小时并溶解于血浆中小心混合并在37°C下孵育4小时。
在开始的第一个小时内,请检查管子,不要摇晃,只需轻轻地倾斜它即可。如果仍然看不到血块,可以每30分钟观察一次,直到4个小时结束。如果4小时后仍为负值,则可在室温下放置24小时。观察并报告结果。
根据经验,一些微生物学家建议使用液体培养基中经过18小时培养的500μl细菌悬浮液进行检测。
与乳化固体培养基中的菌落相比,它似乎提供了更快,更可靠的结果,尤其是如果使用了从血库获得的人血浆时。
使用来自肉汤的菌株有助于稀释血浆中人抗葡萄球菌抗体的可能存在,该抗体可以抑制凝固酶的作用。
解释
如果发现凝块涵盖了所有液体(完全凝结)或剩余液体中没有任何凝块(部分凝结),则应视为阳性试验。
如果没有形成凝块,即悬浮液保持均匀,则测试为阴性。
-使用纤维蛋白原的凝血酶测试
纤维蛋白原的使用与血浆相同,并用于载玻片和试管测试。按照有关血浆的描述进行操作,并以相同的方式进行解释。
用
它用于区分金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌。
质量检查
有新鲜的金黄色葡萄球菌菌株培养物可用作阳性对照。表皮葡萄球菌菌株也可作为阴性对照。
局限性
-由于金黄色葡萄球菌会产生可溶解血凝块的纤维蛋白溶素,因此孵育24小时后不应再进行阳性试验。
-为进行可靠的测试,应使用新鲜的或新配制的血浆,并且使用新鲜的细菌培养物(18至24小时)也很重要。这避免了假阴性。
-测试必须与阴性和阳性对照一起进行。
-某些固体培养基会干扰凝血酶测试。不建议使用来自咸甘露醇琼脂的菌落。
-如果使用柠檬酸血浆,建议每毫升血浆中放置5单位肝素,以免出现假阳性。这是因为除了金黄色葡萄球菌以外的某些微生物还可能分解柠檬酸盐并导致血浆凝结。在这种情况下,建议进行革兰氏和过氧化氢酶测试。
-在试管测试中,每30分钟监测一次反应非常重要,因为有些金黄色葡萄球菌菌株会产生高浓度的纤维蛋白溶素,并会迅速稀释新形成的血凝块。避免误报。
-监测测试时,避免突然摇动试管,这会破坏血凝块形成的开始,以后将无法恢复,从而导致假阴性。
参考文献
- Koneman E,Allen S,Janda W,Schreckenberger P,Winn W.(2004年)。微生物学诊断。第五版。社论Panamericana SA阿根廷。
- 福布斯(Forbes B),萨姆(Sahm D),韦斯菲尔德(Weissfeld)A.(2009)。Bailey&Scott微生物学诊断。12版。社论Panamericana SA阿根廷。
- Mac Faddin J.(2003)。生化测试用于鉴定具有临床重要性的细菌。第三版。社论泛美。布宜诺斯艾利斯。阿根廷。
- Pro-Lab实验室。兔子使血浆凝结。可在以下网站获取:pro-lab.com
- “凝固酶。” 维基百科,免费百科全书。2019年2月12日,世界标准时间(UTC)。2019年4月22日,15:50 wikipedia.org。