培养基的制备是实验室中用于所需微生物生长的常规方法。培养基是固体,液体或半固体制剂,它们具有微生物种群发展所需的所有营养素。
通常,用于培养微生物的方法富含蛋白质和氨基酸,并且通常包含有利于待研究生物生长的某些成分,例如维生素,血液,血清等。
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没有通用或通用的培养基,因为其组成根据感兴趣的微生物的需要而变化。有些细菌可以在任何培养基中生长,但其他细菌有特殊要求。
它由什么组成?
微生物,例如真菌和细菌,由于其体积很小,无法单独研究。因此,必须以人工方式种植它们,以使人口大量增加。
例如,如果我们想研究细菌,我们必须为它们提供适当的条件,以便它们能够繁殖并形成菌落(可以用肉眼观察到)。
培养基的制备取决于要培养的微生物的类型而有很大不同。在准备之前,有必要了解工作生物的基本营养需求。
下面将描述培养基中最常用的成分,以大致了解其制备方法:
琼脂
它在培养物中用作胶凝剂,在寻找固体或半固体培养基时添加。用于制备培养基的第一种固化剂是明胶,但在1883年,W。黑塞将琼脂引入了细菌学领域。
细菌琼脂的主要成分是多糖,该多糖具有从藻类中提取的复杂分支。该化合物在冰淇淋和果酱等普通食品中用作增稠剂。
由于多种原因,它是微生物学中非常有价值的元素。主要是因为微生物无法降解,所以它在100°C的温度下会液化并保持液态直到达到45°C或更低。
如果要制备固体培养基,琼脂浓度应在1.5%左右,而半固体应在0.3%至0.5%之间。
液体
病原生物的培养需要体液,以便它们可以像在自然环境中那样生长。因此,要添加全血或除颤血。该流体取自健康的动物,并且一旦灭菌,就将其添加到培养基中。
摘录
它们是从不同的动物部位(例如肉或肝)或蔬菜(种子)中获得的,经过加工后制成糊状或粉末状的固体浓缩物。最常见的是酵母,麦芽和肉。
蛋白ept
这些有机化合物是通过动物或植物组织的酶促或化学水解获得的。目的是添加富含氨基酸的内容物,氨基酸是蛋白质的基本单位。
减震器
“缓冲液”或缓冲液系统可避免pH值突然变化,并有助于维持人体可以承受的最佳范围。
尽管有些细菌更喜欢碱性介质,但大多数生物在7的pH值下都能很好地繁殖。但是,有些细菌可以抵抗6到9之间的pH值变化。
在对pH敏感的物种中,损坏不是由过量的氢或氢氧根离子产生的,而是由可以穿透细胞的弱酸或弱碱的增加引起的。
同样,添加了pH指示器以对其进行监控,并避免了发酵或其他过程引起的偏差。
目标
制备培养基的主要目的是添加所有必要的成分,以使成功分离出生物体成为可能。必须确定最有效的成分和营养组合以达到所需的培养基。
培养基的制备和储存对于确保成功生长至关重要,因为培养基的组成和营养物质的可用性取决于这些步骤。
必须考虑到微生物的培养是受培养基外部几个因素影响的任务,例如,所接收的光强度,温度以及培养基的酸度或碱度水平。因此,必须考虑这些变量中的每一个。
媒体类型
根据其成分
根据它们的成分,主要有三种农作物类型:自然或经验性,半合成和特定的合成或化学介质。
自然环境
在自然环境中,确切的成分是未知的。这些包括成分,例如牛奶,稀释的血液,蔬菜汁,肉类和蛋白and的提取物和浸膏。出于经济原因,通常添加廉价成分,例如大豆提取物,乳清,糖蜜等。
半合成媒体
如果部分成分已知,则称其为半合成介质。含有琼脂的任何培养基都将成为半合成培养基。
其中包括马铃薯葡萄糖琼脂,czapek-dox琼脂,燕麦琼脂,肉蛋白ept琼脂等。
合成或化学定义的介质
在这种情况下,就碳,氮,硫,磷和任何其他所需生长因子的来源量而言,培养基的组成是众所周知的。如果您想为其他研究人员获得可重复的结果,这将非常有用。
对于所谓的“具有特殊生长要求的微生物”,有必要添加必要的成分。这种类型的一个例子是乳杆菌。
基于微生物的类型
类似地,根据可在其上生长的微生物的类型,对培养基进行了另一种分类。遵循这一原则,我们具有以下一般,丰富,选择和区分的手段。每个描述如下:
普通媒体
这些支持多种微生物的发展。如果任何生物需要特殊的生长条件,就无法在这种类型的培养中成功发育。
富媒体
富集培养基支持某种类型的微生物的生长,但是没有添加任何物质来阻止其他类型的微生物在其中生长。
选择性媒体
他们寻找微生物的特定生长,称其为真菌,细菌,原生动物等。为此,它们抑制了他人的发展。
为了实现此目标,可以添加对多种微生物具有致命作用且对目标生物无害的化合物,或添加只能被目标微生物吸收的能源。
在采集医学样本时使用选择性培养基以培养病原性微生物。在这里,有必要促进病原体的生长并抑制患者正常微生物菌群的发育。
例如,亚硫酸铋琼脂不允许革兰氏阳性细菌的生长以及在胃肠腔中发现的大量细菌的生长。因此,它被用于在粪便样品中培养引起伤寒的革兰氏阴性细菌,即伤寒沙门氏菌。
差异媒体
这种类型利用目标生物的某些诊断特征(例如,其代谢中的特殊性)能够针对在相同环境中生长的其他物种识别它们。
差异培养基和选择性培养基在临床微生物学和公共卫生领域都非常有用,因为这些学科需要检测与病理或不良卫生状况有关的特定微生物的存在。
可以将指示物质添加到培养物中,使寻找的菌落具有鲜明的特征。例如,将乳糖和pH指示剂添加到琼脂-曙红-亚甲基蓝(缩写为EMB)和MacConkey琼脂中。
因此,当在这些培养基中形成具有发酵乳糖和产生醛的能力的菌落时,可以观察到它们具有特殊的颜色。
脚步
当前,培养基可以冻干形式购买。因此,制备更容易,唯一要做的就是使产品再水化。必须按照产品的所有指示称量内容物(考虑到最终准备的量)并溶解在蒸馏水中。
液体介质的内容物必须分成所需的容器(培养皿,试管等)以进行后续灭菌。为了分配固体介质,必须使用微波将其熔化或将其置于水浴中。必须调节培养基的pH。
通常将琼脂用于试管或培养皿中。如果琼脂以适当的角度在倾斜位置固化,以使最终末端边缘为对角线,则这种布置称为喙或倾斜管。当琼脂在完全垂直的位置凝固时,称为“深”。
在用高压灭菌器对介质灭菌之后,让它们冷却。这些必须在没有微生物的环境中进行处理,最常见的是使用带照明的打火机,以确保附近有无菌环境。
参考文献
- Celis,JE(2006)。细胞生物学:实验室手册(第2卷)。爱思唯尔。
- Finegold,SM,Bailey,WR,Baron,EJ,Fineglod,SM,&Scott,EG(1991)。Bailey Scott:微生物学诊断。泛美医学。
- Olivas,E。(2004)。微生物学I,II和寄生虫学实践手册。华雷斯自治大学。
- Schlegel,HG,和Zaborosch,C。(1993)。普通微生物学。剑桥大学出版社。
- Tortora,GJ,Funke,BR和Case,CL(2007)。微生物学导论。泛美医学版