血琼脂：基本原理，用途和制备方法 - 生物学 - 2025

该血琼脂是固体培养基富集差动但非选择性的。它用于从临床样品或亚培养物中恢复和生长多种微生物。

实验室中收到的大多数临床样品的接种应包括经典血琼脂；除无用的粪便样品外，除非经过特殊修改。

血琼脂板

这种培养基基本上由丰富的基础琼脂和5％的血液组成。琼脂基质可以根据需要而变化，但是它将主要由蛋白ept，氨基酸，维生素，肉提取物，氯化钠，琼脂等组成。

至于血液，通常需要与动物舍接触以从动物，例如绵羊，兔或马获得血液。但是，这并非总是可能的，有时会使用人体血液。

血琼脂培养基可以在实验室中制备，也可以从专门的公司购买。该培养基的制备是最精密的方法之一，任何不小心都会导致批次污染。

这就是为什么必须采取所有可能的预防措施，最后必须通过在37°C下孵育每100份培养板1进行质量控制的原因。

基础

在血琼脂上培养金黄色葡萄球菌。内森（Nathan）通过Wikimedia Commons在Twitter上的Flickr内森·R。（Nathan R.）上阅读血琼脂具有作为一种富集，分化和非选择性培养基的特征。这些属性的基础在下面说明。

血琼脂是一种富集的培养基，因为它在琼脂基质上含有5-10％的血液作为其主要添加剂。两种化合物都包含许多营养素，并且该特性允许大多数可培养细菌在其中生长。

增长不受限制；因此，它是非选择性的。但是，如果将化合物添加到该介质中以阻止某些微生物的生长，而有利于其他微生物的生长，则该化合物具有选择性。如果添加某些类型的抗生素或抗真菌药，情况就是这样。

同样，血琼脂是一种差异培养基，因为它可以区分三种类型的细菌：β-溶血性，α-溶血性和γ-溶血性。

β-溶血剂是指具有完全溶解或分解红细胞，在菌落周围形成清晰光环的能力，因此它们会产生ß或ß溶血作用，而微生物被称为ß溶血作用。

β-溶血性细菌的例子有化脓性链球菌和无乳链球菌。

α-溶血剂是进行部分溶血的溶血剂，其中血红蛋白被氧化成高铁血红蛋白，在菌落周围产生绿色。这种现象称为α或α-溶血作用，细菌被分类为α-溶血作用。

α溶血性细菌的实例是肺炎链球菌和viridans组的链球菌。

最后，有所谓的γ-溶血或非溶血细菌。它们在琼脂上生长而不产生变化，这种作用称为γ-溶血作用，微生物是γ-溶血作用。

γ-溶血性细菌的例子：D组链球菌的某些菌株（牛链球菌和粪肠球菌）。

应用领域

血琼脂培养基是微生物实验室中最常用的一种。

能够在血琼脂培养基上生长的微生物包括：严格的需氧，兼性，微需氧，厌氧，革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌，快速生长或缓慢生长的细菌。

一些营养需要或挑剔的细菌以及真菌和酵母菌也会生长。同样，对于传代或代谢非常弱的菌株也很有用。

但是，血型和基础琼脂的选择将根据怀疑恢复的可能微生物和将用于平板的用途（培养物或抗菌素）而有所不同。

血型选择

血液可以是羔羊，兔子，马或人的血液。

除了一些例外，最推荐的是羊血。例如，要分离推荐的血液是马血或兔血的嗜血杆菌属物种，因为羔羊血中含有抑制因子V的酶。

最少推荐使用人类，但是使用最多，可能是因为它最容易获得。

血液必须是无纤维的，不能从任何类型的添加剂中获取，并且必须来自健康的动物。对于使用人类血液，必须考虑以下几个因素：

如果血液来自细菌感染的个体，他们将具有特异性抗体。在这些条件下，某些细菌的生长很可能被抑制。

如果是从血库获得的，则其中含有柠檬酸盐，某些细菌在存在时可能不会生长。另一方面，如果血液来自正在服用抗生​​素的患者，那么敏感细菌的生长就会受到抑制。

如果血液来自糖尿病患者，那么过量的葡萄糖会干扰溶血模式的正常发展。

基础琼脂类型的选择

用于制备血琼脂的基础琼脂可以非常广泛。其中包括：营养琼脂，脑心浸液琼脂，胰蛋白酶大豆琼脂，MüellerHinton琼脂，Thayer Martin琼脂，Columbia琼脂，布鲁氏菌琼脂，弯曲杆菌琼脂等。

血琼脂根据其制备所用的基本培养基的用途

营养琼脂

该碱使用最少，因为它主要生长不需要的细菌，例如肠杆菌，假单胞菌，金黄色葡萄球菌，芽孢杆菌等。不建议分离链球菌。

脑心浸液琼脂（BHI）

它是最广泛用作血琼脂的基质之一，因为它具有大多数细菌（包括链球菌sp和其他需要的细菌）生长所必需的营养。尽管不宜观察溶血模式。

通常将羔羊的血与该碱一起使用。

也可以制备血琼脂变体，其中添加其他化合物以分离某些微生物。例如，补充有兔血，胱氨酸和葡萄糖的脑心浸液琼脂可用于分离土拉弗朗西斯菌。

同时，对于胱氨酸亚碲酸盐，它可用于分离双歧棒状杆菌。可以使用人血或羊血。

第一次β-溶血会被认为是狭窄的晕圈，而第二次β-溶血会被认为是宽得多的晕圈。

同样，该底物与杆菌肽，玉米淀粉，马血和其他富集补品（IsoVitaleX）一起用于从呼吸道样本中分离出嗜血杆菌属。

而且，如果添加抗生素氯霉素-庆大霉素或青霉素-链霉素与马血的组合，即使分离出比Sabouraud葡萄糖琼脂更高的产量，它也是分离高要求病原性真菌的理想选择。它在荚膜组织胞浆菌的分离中特别有用。

胰蛋白酶大豆琼脂

最推荐使用此底物，以更好地观察溶血模式并进行诊断测试，例如光喹啉类和杆菌肽。常规使用的是经典的血琼脂。

有了这个基础，您还可以用半胱氨酸亚碲酸盐和羔羊血制备用于双歧杆菌的特殊血琼脂。

同样，这种琼脂与羔羊血液的结合，加上卡那霉素-万古霉素，对于厌氧菌，尤其是拟杆菌的生长是理想的。

米勒·欣顿琼脂

用这种补充有血液的碱进行抗微生物微生物如链球菌sp。的抗菌谱。

它也可用于分离细菌，如嗜肺军团菌。

Thayer Martin琼脂

当怀疑淋病奈瑟氏球菌属，特别是脑膜炎奈瑟氏球菌时，这种培养基是理想的血琼脂基础，因为淋病奈瑟氏球菌不会在血琼脂上生长。

它也用于测试对脑膜炎奈瑟氏球菌的敏感性。

哥伦比亚琼脂

该基础非常适合用于幽门螺杆菌的胃活检标本的播种。

通过添加7％的用抗生素（万古霉素，甲氧苄啶，两性霉素B和头孢磺啶）去纤维化的羔羊血制备培养基，以限制可能存在的其他类型细菌的生长。

补充了人血或羔羊血，萘啶酸和大肠粘菌素的相同碱基可用于分离阴道加德纳菌。它也是评估同一微生物对抗生素的抗菌敏感性的理想选择。

此外，它还用于制备用于培养厌氧菌的血琼脂，并添加氨基糖苷和万古霉素。

该基础允许正确观察溶血模式。

布鲁氏琼脂

这种培养基可作为血琼脂的基础，再添加维生素K，是培养厌氧细菌的理想选择。在这种情况下，建议使用羊血。

弯曲杆菌琼脂

弯曲杆菌琼脂补充了5％的羊血和5种抗生素（头孢菌素，两性霉素B，甲氧苄啶，多粘菌素B和万古霉素），是用于分离粪便样品中空肠弯曲菌的培养基。

制备

每个商品房都会在包装箱的背面带上准备一升培养基的说明。根据所选的基础琼脂，可以进行相应的计算以制备所需的量。

称重并溶解

基础琼脂是脱水的（粉末），因此必须将其溶解在pH 7.3的蒸馏水中。

称量所选择的基础琼脂表示的量，并将其溶解在烧瓶中的相应量的水中，然后用中度加热并旋转运动混合直至所有粉末溶解。

消毒

溶解后，在121℃的高压釜中灭菌20分钟。

血液聚集

当离开高压釜时，将烧瓶冷却直至温度在40至50°C之间；这是人类皮肤所支撑的温度，同时琼脂尚未固化。

为此，用手触摸小瓶，如果可以忍受热量，则添加相应量的去纤维化血液（每升琼脂50毫升）是理想的温度。轻轻混合均匀。

血液凝集的通过至关重要，因为如果在培养基非常热的情况下进行，则红细胞会分解，并且培养基将无法观察溶血。

如果添加得太冷，则会结块，介质表面将不光滑，无法正确打分。

倒入培养皿

将血液匀浆后立即放入无菌培养皿中。每个培养皿中倒入约20毫升。该过程在层流罩或燃烧器附近进行。

在培养皿中加入血琼脂时，板表面不应留有气泡。如果发生这种情况，本生灯的火焰会迅速通过板上，以消除它们。

使板固化并倒置保存在冰箱（2-8°C）中直至使用。在使用血琼脂平板之前，必须对其进行调温（允许达到室温）以便能够播种。

制备的板持续约1周。

参考文献

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