所述介质斯图尔特是半固体琼脂或液体培养基没有营养物,用于生物样品的运输。其目的是使样品中存在的菌株在一定时间内保持活力,但又不增加微生物种群。
它由Moffet,Young和Stuart于1948年创建,后来被Toshach和Patsula修改。它由甘油磷酸钠,巯基乙酸钠,氯化钙和琼脂组成。后者存在于半固体介质中,而在液体中不存在。一些实验室在其中添加了亚甲蓝。
文化与斯图尔特运输。来源:作者:CDC / Dr. 吉尔达·琼斯(Gilda Jones),礼貌:公共卫生图片库
它们通常在无法立即播种的情况下使用。在这种情况下,将样品放在运输介质中,同时将其转移到将处理培养物的实验室中。
以这种方式,确保存在的微生物保持存活直到它们被接种在相应的培养基中。
最初,它的用途是用于运输怀疑存在淋病奈瑟氏球菌的尿道或阴道样本。后来,他们意识到它的用途可能更广泛。
事实证明,Stuart培养基在保存不稳定和挑剔的微生物(例如脑膜炎奈瑟氏菌,流感嗜血杆菌,化脓性链球菌,肺炎链球菌,双歧杆菌,百日咳博德特氏菌等)方面非常有效。除了其他非烦人的微生物,如肠杆菌。
Stuart培养基基本上可以防止样品干燥,保持渗透平衡并在理想的pH值下保存微生物。另一方面,该培养基从战略上讲不含营养成分,因此可以防止微生物繁殖。
市场上有一些特殊的样品运输设备,其中包含这种或其他运输工具,称为培养皿。它们也可以在实验室中制备。
基础
Stuart运输方式的目的是使样品保持接近原始状态,直到对其进行处理。
甘油磷酸钠和氯化钙是一种缓冲系统,可通过维持pH和渗透压来发挥作用。
同时,巯基乙酸钠用作还原剂,在含有琼脂的情况下,它具有半固体稠度,以延迟培养基的充氧。最后,亚甲蓝是一种氧化指示剂,也就是说,它可以检测到氧气的存在。
具有氧化还原指示剂的半固体培养基非常适合用于运输怀疑存在厌氧菌的样品。
运输工具的特征
与所有运输工具一样,Stuart介质具有某些特征,包括:
-保持存在的存活微生物菌株而不会繁殖。
-不含营养素;它的化合物旨在在适当的pH和渗透压条件下保持样品水合。
-抑制某些脆弱微生物(例如肺炎球菌)的自溶。
-它的使用是暂时的,不应延长太长时间。
制备
带有氧化还原指示剂的半固态Stuart培养基
家庭准备
配料
甘油磷酸钠10克
硫代乙醇酸钠1.0克
氯化钙0.1克
亚甲蓝0.002 gr
琼脂3克
蒸馏水1升
混合各组分并加热直至完全溶解。倒入试管或特殊拭子中。将它们引入高压釜中,并在121ºC下灭菌15分钟。让管子在垂直位置冷却(呈块状)。保持在室温下。
用商业培养基制备
在1升蒸馏水中称取14.1克培养基。经常加热摇动直至完全溶解,然后将其煮沸即可。其余过程如前所述。
脱水培养基为米黄色,制备后的表面应为蓝色。这是由于存在亚甲蓝。
培养基的pH值必须调节到7.4±0.2
液体改性Stuart培养基(自制)
配料
甘油磷酸钠10克
硫代乙醇酸钠1克
二水氯化钙0.1克
蒸馏水1000毫升
它具有与半固体相同的成分,但没有琼脂或亚甲蓝。在这种情况下,无需加热即可混合各组分,并将0.5 ml分配在带螺帽的16 x 125 mm管中。
将其在121℃的高压釜中灭菌10分钟。对于采样,如果样品用于PCR或人造丝,则应使用涤纶拭子,如果用于培养则应使用人造丝。
试管在室温下保存。
应用领域
商业上有称为培养皿的特殊样品运输设备。该装置是细长的细管,其内部有拭子,末端有一个包含半固体或液体Stuart培养基的部分。
打开设备,用拭子取样。然后将其重新引入管中,直到拭子尖端插入半固体运输介质中为止;有些带入了浸有液体Stuart介质的聚氨酯海绵,当样品保持潮湿时,可以将其保存起来。
如果怀疑存在精致的微生物,则应使用带有木炭的棉签收集样品。
可以用拭子或拭子采集并转移到这种培养基中的样品是咽部分泌物,直肠拭子和各种分泌物,其中包括:阴道,尿道,伤口,眼,耳和脓肿。
在将样品从运输介质中转移到实验室的过程中,必须避免使介质处于极端环境条件下(太冷或太热)。还应避免大气压的突然变化。
培养基能够保持微生物存活的时间将取决于所讨论的菌株。例如,对于奈瑟氏球菌和嗜血杆菌属的微生物,它们可以存活长达24小时,但是诸如沙门氏菌或志贺氏菌的菌株可以持续数天甚至数周。
如果估计样品的处理可能需要4天以上,则最好将样品冷冻在-70°C下。
在运输工具中识别样品
准备好的运输工具或商业培养皿必须带有标签,在其中粘贴以下信息:
患者的名字和姓氏:避免样品混淆。
识别号:方便下订单。
样品收集来源:帮助细菌学家选择合适的培养基。
主治医生:有时有必要进行咨询。
样品采集的日期和时间:根据样品采集到实验室接收之间的时间,有必要接受或拒绝样品。
附加的其他非常有用的信息是:
推定诊断:根据可疑诊断指导添加特殊培养基。
抗生素治疗:将其附在抗菌素图中很有用。
所有这些信息对于确保正确处理样品至关重要。
质量检查
为了评估Stuart培养基的性能,可以接种已知菌株并保持在25°C下,例如:百日咳博德特氏菌ATCC 9340,流感嗜血杆菌ATCC 19418,淋病奈瑟氏菌ATCC 19424,脑膜炎奈瑟氏菌ATCC 13090,肺炎链球菌ATCC 6301。
在所有情况下,都有望回收所讨论的微生物,并保存24小时。
另一方面,可以使用其他菌株,例如:弗氏志贺氏菌ATCC 12022,金黄色葡萄球菌ATCC 6538,化脓性链球菌ATCC 12344,粪肠球菌ATCC 33186,铜绿假单胞菌ATCC 27853和大肠杆菌ATCC 11775。
在所有情况下,预计最多可恢复96小时。
局限性
一些研究确保存在于Stuart培养基中的甘油磷酸可以被其他大肠菌和其他革兰氏阴性细菌代谢,因此可以在该培养基中繁殖。
样品处理延迟的时间越长,风险越大。同样,Stuart介质在运输过程中暴露于高温也会对此产生影响。
参考文献
- “运输媒介(微生物学)。” 维基百科,免费百科全书。2018年4月13日,10:36 UTC。2019年4月1日,网址:es.wikipedia.org
- Microkit实验室:文化媒体。斯图尔特运输。可用位置:可用位置:Medioscultivo.com
- LabLisan。斯图尔特的交通工具。可在以下网址获得:lablinsan.cl
- 科学MDM。拥有Stuart微生物运输介质的优势。可在mdmcientifica.com上获得
- Metrix实验室。斯图尔特 2017年可用:metrixlab.mx
- 福布斯(Forbes B),萨姆(Sahm D),韦斯菲尔德(Weissfeld)A.(2009)。Bailey&Scott微生物学诊断。12版。社论Panamericana SA阿根廷。
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