该SIM培养基是半固体和鉴别琼脂,专门帮助找出一些细菌,特别是肠杆菌。它由三肽,蛋白ept,硫酸铁,硫酸铵,硫代硫酸钠和琼脂组成。
该介质可以执行三个重要的测试:硫化氢(H 2 S)的产生,吲哚的形成和运动性,因此缩写为SIM。由于其巨大的实用性,它在细菌学实验室中是不可能没有的。
A.商业SIM介质B. SIM H2S(-),吲哚(-)和运动性(+)测试以及SIM H2S(+),吲哚(-),运动性(+)测试。资料来源:A.作者MSc摄。Marielsa Gil B.Mfloayza
与其他介质不同,此介质必须是半固体,才能检测到某些细菌的运动能力。从这个意义上讲,该测试对肠杆菌科非常有效,但不适用于非发酵革兰氏阴性棒,而其他方法更可取,例如悬滴法。
SIM介质允许区分某些特定特性,这些特定特性表征某些细菌相对于其他细菌的特征。例如,大肠杆菌的特征是H 2 S(-),吲哚(+)和运动性(+),而奇异变形杆菌是H 2 S(+),吲哚(-),运动性(+)。
基础
它是一种差异化的培养基,因为它的用途将能够产生硫化氢的微生物与不产生硫化氢的微生物区分开来。它还强调了那些从色氨酸形成吲哚的人和那些没有形成色氨酸的人,并最终将活动细菌与固定细菌区分开来。
能量源
像任何培养基一样,它具有提供必需营养素的元素,这样就可以产生不需要的微生物。这些元素以蛋白ept和三肽为代表。
培养基中微生物的生长对于能够观察该培养基评估的特征的存在与否至关重要。
硫化氢的生产
首字母缩写词SIM的字母S表示硫化氢(H 2 S)的产生。能够形成硫化氢的细菌将从硫代硫酸钠吸收硫。
一旦形成H 2 S(无色气体),它就会与存在于介质中的铁盐反应,生成清晰可见的硫化亚铁(黑色沉淀物)。不形成H 2 S的细菌会保留原始颜色(米色)的介质。
黑色沉淀物的存在会阻碍对运动性的解释。但是,已知大多数产生H 2 S的肠杆菌科细菌都是阳性的,例如沙门氏菌,变形杆菌和柠檬酸杆菌。此外,几乎覆盖整个培养基的黑色沉淀物表明具有正运动性。
吲哚形成
首字母缩写词SIM的第二个字母是“ I”,代表吲哚的形成。
从这个意义上讲,三叉蛋白除了是营养的来源外,还具有另一个基本功能。此蛋白ept富含称为色氨酸的氨基酸,因此,它可以显示产生色氨酸酶的细菌。
该酶负责切割氨基酸色氨酸,从而形成吲哚(无色物质),丙酮酸和铵。
因此,为了显示该反应,必须添加显露性物质(Ehrlich试剂或Kovac试剂)。两者都会与吲哚发生反应,在琼脂表面上形成紫红色的环状物质。如果出现紫红色环,则吲哚测试被解释为阳性。
不具有这种酶的细菌将不会形成环,并且被解释为阴性的吲哚试验。
重要的是要注意,吲哚试验应该最后解释一次,因为一旦加入试剂,培养基就会变得浑浊,很难观察到运动性。
动力性
最后,单词SIM的字母“ M”表示运动。为了评估运动性,此介质在策略上应为半固体,因为此特征对于能够观察是否存在细菌运动至关重要。拥有鞭毛的细菌就是那些可以进行阳性测试的细菌。
当在最初的接种物中及其周围都观察到浊度时,将显示阳性测试。然而,非运动性细菌仅在初始接种物的路径中发育。
制备
中型SIM卡
称重30克脱水培养基,并溶于一升蒸馏水中。将混合物静置5分钟,然后加热至沸腾,经常搅拌直至完全溶解。
将混合物分配到带有棉帽的试管中,并在121°C高压灭菌15分钟。从高压釜中取出试管架,使其在垂直位置固化,以使介质呈块状。
为了保存,将其保存在冰箱中直至使用。制备的培养基的最终pH必须为7.3±0.2。
在接种培养基时,它必须处于室温下。中间颜色是米色。
Kovac的试剂
量取150毫升戊基或异戊基或丁醇。(使用提到的三个之一)。
溶解10克对-二甲基氨基苯甲醛。然后缓慢加入50毫升浓盐酸。
即用型试剂为无色或浅黄色。应将其保存在琥珀色的瓶子中,并保存在冰箱中。如果它变成深棕色,请勿使用。表示它已损坏。当涉及肠杆菌科时,该试剂是优选的。
埃利希试剂
称取2 g对二甲基氨基苯甲醛,溶于190 ml无水乙醇中,并与40 ml浓盐酸缓慢混合。以相同的方式储存Kovac的试剂。Ehrlich的试剂最常用于非发酵和厌氧细菌。
应用领域
SIM培养基在细菌学实验室中得到了高度使用。它的优点是在鉴定肠杆菌科的同一管中可以观察到三个基本特征。
播种
播种这种培养基的正确方法是使用针头,用该针头采集一部分要研究的纯菌落并将其垂直插入培养基的中心。应该执行一次弓步。穿刺不应到达管的底部,正确的做法是仅覆盖三分之二的深度。
不建议重复接种,因为这可能导致对阳性运动的错误解释。将接种的培养基在37°C有氧条件下孵育24小时。
时间结束后,观察是否产生H 2 S并读取运动性。最后将吲哚暴露出来,加入3至4滴Ehrlich或Kovac试剂,轻轻混合并解释。
资料来源:Koneman E,Allen S,Janda W,Schreckenberger P,Winn W.(2004年)。微生物学诊断。第五版。社论Panamericana SA阿根廷。
质量检查
作为无菌控制,将一根或两根试管在37°C的烘箱中孵育而不接种24小时。预计在此时间之后,不会增长或变色。
作为质量控制,可以使用已知的认证菌株,例如:大肠杆菌ATCC 25922,产气肠杆菌ATCC 13048,肺炎克雷伯菌ATCC 13883,鼠伤寒沙门氏菌ATCC 14028,索尼氏志贺氏菌ATCC 29930,寻常变形杆菌ATCC 13315。
预期的结果是:大肠杆菌H 2 S阴性,吲哚和正运动,产气肠杆菌仅阳性运动,鼠伤寒沙门氏菌H 2 S和阳性运动,而吲哚为阴性。寻常变形杆菌均为阳性,而肺炎克雷伯菌和志贺氏菌均为阴性。
局限性
-某些摩根氏摩根氏菌菌株,由于产生黑色素,可在该培养基中产生褐色颜料,不应将其与硫化亚铁的沉淀物混淆。在没有经验的专业人员中,这种情况会在H 2 S 检验的解释中产生假阳性。
-严格的需氧细菌只会在试管表面生长,从而难以解释运动性。
参考文献
- BD实验室。BBL SIM中号。2008。可在以下网站找到:bd.com
- Neogen实验室。SIM卡中号。可用于:食品安全
- Difco Francisco Soria Melguizo。SIM卡中号。2009年,可访问:http://f-soria.es
- Brizuela实验室实验室。中型SIM卡。可在以下网址获得:.brizuela-lab.com
- 大不列颠实验室。中型SIM卡。2015年,可访问:studyres.es/doc
- Koneman E,Allen S,Janda W,Schreckenberger P,Winn W.(2004年)。微生物学诊断。第五版。社论Panamericana SA阿根廷。