赖特的污点：基本原理，材料，技术和用途 - 生物学 - 2025

该赖特染色是由美国病理学家詹姆斯·荷马·赖特于1902年创建的染色技术的基础上，Romanowsky污点。由于Romanowsky染色不稳定，因此Wright加入了甲醇作为溶剂和固定剂。

这种颜色是多色的，这意味着它会根据吸收染料的结构产生几种颜色。这种染色技术已被广泛用于进行白细胞计数和研究外周血和骨髓中红细胞，血小板和白细胞的形态。

各种外周血涂片均沾有赖特氏染色剂。A.急性白血病B.红细胞内的间质疟原虫。C.恶性疟原虫，大配子体细胞。D.淋巴细胞

它的应用非常重要，因为可以在血液的不同细胞系中看到异常，从而有助于诊断疾病，例如白血病，细菌或寄生虫感染。

也许这些是使用此技术的最常见应用程序，但是并不是唯一的应用程序。它也可用于血液和骨髓以外的样本，例如鼻分泌物，粪便粘液，痰液，皮肤样本等。

赖特染色的理由

赖特氏染料是从罗曼诺夫斯基氏染料衍生而来的，该染料由酸性染料（曙红Y）和碱性染料（亚甲蓝）的甲醇溶液及其氧化产物组成。

赖特氏染色中使用的染料混合物会产生一种称为罗曼诺夫斯基的效应，即，白细胞和嗜中性颗粒的核赋予美丽的紫色，而红细胞则染成粉红色。

负责产生Wright染料典型色域的成分是蓝色B和曙红Y。观察到的效果将取决于染料与化学结构的结合以及蓝色B和曙红Y的相互作用。

酸性结构（例如核酸，核蛋白和某些细胞类型的反应性未成熟细胞质）固定蓝色B（碱性染料）。

虽然基本结构（例如血红蛋白），分段的嗜酸性粒细胞颗粒以及其他细胞结构与曙红Y（酸性染料）结合。

染色结果会受到不同因素的影响，例如赖特染料，缓冲液和洗涤液的pH；以及染色和固定时间。

因此，试剂制备的每个步骤都是至关重要的，必须注意每个细节。

材料

赖特的污点。对于100毫升，需要：

称出0.3克赖特氏污渍，量取97毫升甲醇和3毫升甘油。

制备

在研钵中，放入大量的Wright着色剂，并逐渐掺入甘油，直到粉末完全溶解。

随后，添加甲醇，混合并倒入琥珀色瓶中。

使用前，应轻轻摇动溶液并过滤。

缓冲溶液

在一升蒸馏水中，添加3.76 g磷酸氢二钠（Na ₂ HPO ₄ 2H ₂ 0）和2.1 g磷酸二氢钾（KH ₂ PO ₄）。

充分混合直至所有掺入的试剂溶解。调节pH至7.2。倒入玻璃罐中并保持在室温下。

进行着色所需的其他材料

此外，还需要其他材料才能执行着色技术，这些材料包括：物体滑片或覆盖物，色桥，用水或缓冲液洗涤的T恤，用于保持着色时间的秒表和一些干燥材料（吸收性纸张，纱布或棉）。

赖特污渍的成分

甲醇

酒精（甲醇）可作为载玻片上血液涂片的固定剂。

它基本上是一种凝结剂还原，脱水和固着剂。因此，其功能是凝结蛋白质并使之不溶，但实际上并未使其变性。

甲醇是所有实验室中使用最广泛的涂片固定试剂，因为它比乙醇提供更好的结果。理想浓度为99％。

减震器

缓冲剂（缓冲溶液）具有调节或维持染料的pH的功能，因为将pH调节至7.2对于细胞结构能够正确吸收染料是必不可少的。

另一方面，甲醇固定步骤使细胞脱水，缓冲液有助于使细胞再水化。

曙红（Y）

曙红对酸性物质具有亲和力，因为它是酸性染料。已知两种类型的曙红非常相似，以至于可以使用两种曙红中的一种，获得相同的结果。

一种称为曙红Y，黄色曙红或四溴荧光素，另一种称为曙红B，蓝色赤藓红B或二溴二硝基荧光素。但是，曙红Y是最常用的。

该染料最重要的特性是其负极性，这使其被吸引到带正电的细胞结构上。

亚甲蓝

这是基本的着色。它的主要特性是变色，即并非所有结构都被染成相同的颜色，这取决于要着色的结构的化学组成。

有些会变成浅蓝色或深蓝色，有些会变成深紫色或淡紫色。

技术

1-进行样品铺展，使薄膜保留在载玻片或盖玻片上。

2-使其在空气中干燥约2小时。

3-将干燥的涂片放在染色桥或染色托盘上，并使样品的涂抹面朝上。

4-逐滴覆盖Wright污渍的纸张，直到覆盖整个表面。停留5-8分钟。

5-污渍应完全覆盖幻灯片，而不会溢出边缘。如果在着色期间开始蒸发，请再添加几滴。

6-随后添加等量的减震器，吹一点直到出现典型的金属光泽。时间10至15分钟。

用自来水7洗，将柔和的水流冲洗至片状变成粉红色。

8-用浸有酒精的纱布去除粘附在玻片背面的染料。

9-在将浸没油放在显微镜下观察之前，让涂片非常干燥。

效用

血液学

它是外周血涂片染色，浓血涂片检查以及骨髓样本细胞研究的理想选择。

由于这种染料组合的化学性质，可以容易地识别细胞结构，并且可以区分存在的不同类型的细胞。

流鼻涕

该技术对于诊断变应性鼻炎的鼻腔分泌细胞（上皮细胞，嗜酸性粒细胞，多形核细胞）非常有用。

寄生虫学

从这个意义上讲，它对于研究皮肤溃疡中皮下细胞组织的组织细胞内的利什曼原虫sp是有用的。同样，它用于鉴定粪便样本中的白细胞（粪便白细胞图）。

在这种情况下，医师感兴趣的是要知道粪便中存在的白细胞增多是多形核还是单核。粪便白细胞检查中的这一发现将分别指导它是细菌感染还是病毒感染。

另一方面，血液中循环的寄生虫可在红细胞内发现或在血浆中游离。所寻找的寄生虫为疟原虫，克鲁斯锥虫和丝虫，在兽医学中，它可用于寻找马鞭毛虫（Theileria equi）和小贝贝虫（Babesia caballi），它们是贝类病的病因，尤其是在马匹中。

Wright染色剂以及Giemsa染色剂可以区分血寄生虫与正常细胞成分。可以使用两种类型的点差：

摊薄

血液以薄膜形式散布在载玻片上。用赖特氏染色剂染色，揭示了细胞核和细胞质的特征。

厚滴

该方法用于调查大量血液中是否存在寄生虫。

为此，将大量的血液放在载玻片上。一旦到达那里，就必须对它进行除颤，使用另一张幻灯片的边缘从中心向外做越来越大的圆圈。

最后，为了能够观察浓密涂片中的寄生虫，必须用水溶解红细胞。

呼吸道感染

在呼吸方面，该技术也是有用的，因为存在于痰液，支气管灌洗液或支气管肺泡样品中的细胞对于建立诊断很重要。

同样，这里可以区分多形核细胞和单核细胞。

细菌学

该技术在细菌学中的应用受到限制，因为它不利于细菌染色，这就是为什么使用其他专门的染色技术对其进行染色的原因。

然而，尽管必须认识到，这并不是最好的方法，但它已被用来在尿道或宫颈内膜粘膜涂片中搜寻具有沙眼衣原体包涵体的上皮细胞。

También es posible observar entre los glóbulos rojos bacterias tipo espiral como la Borrelia burgdorferi en pacientes infectados, así como mórulas o cuerpos de inclusión de Ehrlichia sp en el citoplasma de linfocitos, monocitos o neutrófilos en un frotis sanguíneo.

Micología

El Histoplasma capsulatum es un hongo patógeno frecuentemente diagnosticado por la observación microscópica de diversas muestras de tejidos, teñidas con tinción de Wright.

¿Cómo se observan las estructuras de la muestra sanguínea con la tinción de Wright?

Fuente: Retamales E, Mazo V. Instituto de Salud Pública, Gobierno de Chile. Recomendaciones para la tinción de frotis sanguíneos para la lectura del hemograma.

Recomendaciones para una buena tinción

Las extensiones de las muestras de sangre deben secar al aire espontáneamente. Los frotis deben ser lo más delgados posibles para obtener una mejor fijación del colorante y evitar las sobrecoloraciones.

Para teñidos de alta calidad, se aconseja realizar la tinción durante las dos horas siguientes a la preparación del frotis. Por otra parte, la muestra ideal es sangre capilar, sin anticoagulante.

Sin embargo, si se usa sangre venosa se debe usar como anticoagulante EDTA y no heparina, ya que este último puede deformar las estructuras celulares.

Para evitar el deterioro del colorante preparado se debe guardar en lugares secos.

Durante el proceso del lavado se recomienda el uso de agua ajustada a pH neutro.

Finalmente, es recomendable realizar pruebas a los métodos tintoriales que se usan en el laboratorio cada cierto tiempo.

Esto se realiza tiñendo muestras o extendidos patrones, a manera de control de calidad. Este paso es importante, ya que así se asegura que la tinción está adecuadamente preparada y los tiempos de coloración están bien estandarizados.

Si la lámina patrón queda mal coloreada, entonces existen problemas que deben ser resueltos.

Errores comunes en la coloración de Wrigth

Tinción muy pálida

Los frotis muy pálidos, por lo general se deben a un tiempo muy corto de tinción o a un lavado muy exagerado. Se corrige alargando el tiempo de contacto con el colorante o disminuyendo el tiempo de lavado.

Precipitados del colorante

La presencia de precipitados de colorante en el frotis puede tener varias causas, sin embargo, las causas más frecuentes son: uso del colorante no filtrado, teñir sobre puentes de coloración desnivelados, usar láminas sucias con polvo o grasa, no hacer un buen lavado al culminar la tinción.

Frotis con coloración extremadamente rojiza o azul

El amortiguador es el responsable del pH del colorante. Colorantes con pH por debajo del indicado (ácido) tendrán como consecuencia la obtención de frotis muy rojizos.

Si el pH del colorante está por encima (alcalino) se obtendrá un frotis extremadamente azulado.

Modo de almacenamiento

El reactivo debe almacenarse a temperatura ambiente.

Referencias

1. Gutiérrez V. Estudio comparativo entre el método de coloración de Wright y prueba de Elisa para el diagnóstico de Ehrlichiosis canina en la ciudad de San Pedro Sula, Honduras. 2008. Tesis de Grado para optar al Título de Médico Veterinario. Universidad de San Carlos de Guatemala.
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas F. Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Investigación en Discapacidad. 2014; 3 (1):10-18.
3. «Tinción de Wright.» Wikipedia, La enciclopedia libre. 18 may 2018, 12:05 UTC. 8 dic 2018, 20:37
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6. Retamales E, Mazo V. Instituto de Salud Pública Gobierno de Chile. Recomendaciones para la tinción de frotis sanguíneos para la lectura del hemograma.