的蛋白胨水是液体富集培养基,非选择性,主要用作稀释剂食物样品或其它材料。从化学的角度来看,这种介质非常简单,它包含肉蛋白p,氯化钠和水。
它具有一定的营养价值,可以丰富样品。如果存在滥用的细菌,则该培养基具有修复活力的能力。在回收肠杆菌科细菌的过程中特别有用。
装在瓶中的蛋白ept水。资料来源:理学硕士。玛莉莎·吉尔(Marielsa gil)
在沙门氏菌恢复的情况下,建议使用自助蛋白buffet水变体。这用作样品的预富集介质,在这种情况下,它包含其他元素,例如磷酸二钠和磷酸氢二钾。
正常情况下,蛋白p水是在中性pH值下制备的,但是还有其他一些变体,其中pH值必须为8.5±0.2(碱性),因为要分离的细菌是嗜碱的,例如霍乱弧菌。
此外,该培养基可用作碳水化合物发酵测试的基础培养基。
基础
蛋白ept提供细菌生长所需的营养,尤其是氮和短链氨基酸,而氯化钠则保持渗透平衡。
此外,培养基使分散,均质化和修复已经被工业过程破坏的细菌细胞成为可能。
作为稀释剂,理想的是有效替代生理溶液(SSF)或磷酸盐缓冲溶液(PBS)。
通过观察其浊度可以明显地看出细菌的生长。
制备
自制制剂(非商业用途)
称出1克蛋白ept和8.5克氯化钠,溶于1升蒸馏水。pH应调节至7.0。为此,可以使用1N氯化钠。
使用商业培养基制备
称重15克脱水培养基,并溶于一升蒸馏水中。均质混合物。如有必要,将混合物煮沸1分钟以帮助完全溶解。根据需要装入100毫升瓶或10毫升试管中。在121℃下高压灭菌15分钟。
冷却并在冰箱中使用或存放。培养基的最终pH为7.2±0.2。
脱水介质的颜色为浅米色,制备的介质为浅琥珀色。
发酵测试准备
在之前的准备工作中-灭菌之前-必须将碳水化合物的最终浓度添加到1%,再加上安德拉德指示剂(酸性品红)或酚红(0.018 g / L)。试管应装有达勒姆钟罩,以观察气体的形成。
蛋白ept水的其他变体
缓冲或缓冲蛋白ept水
它包含酪蛋白的酶解产物,氯化钠,磷酸二氢钾和十二水磷酸氢钠。最终pH为7.0±0.2。
对于其制备,称重20 g脱水培养基,并溶于1升蒸馏水中。静置约5分钟。加热1分钟直至完全溶解。
根据需要倒入合适的广口瓶中。使用高压釜在121°C消毒15分钟。
-碱性蛋白ept水
称重25克脱水培养基,溶于1升水中。如上所述进行。pH范围为8.3至8.7。
用
通过直接放置样品来完成接种。
它用于稀释样品,尤其是在怀疑可能损坏细菌的情况下。通常稀释度为1:10和1:100。
在35-37°C的需氧菌中孵育24小时。
凳子样本
对于沙门氏菌的粪便样品,建议使用缓冲水或缓冲水作为预富集介质。
为此,请按照下列步骤操作:
如果粪便形成,则取1克样品。如果它们是液体,则取1 ml粪便,并悬浮于装有10 ml自助蛋白ed水的试管中。如果是直肠拭子,请用蛋白p缓冲水将拭子中的物质排入试管。
在所有情况下,均应将样品充分混合均匀。
在37°C下孵育18至24小时。随后在富集肉汤(如亚硒酸胱氨酸肉汤或四硫代肉汤)中于37°C传代培养18-24小时。最后,在沙门氏菌的选择性培养基中培养,例如SS琼脂,XLD琼脂,Hektoen琼脂等。
食物样本
蛋白ept水用作富集培养基或用作简单的稀释剂,但是,如已描述的,如果要寻找沙门氏菌,可以将其用作预富集培养基。
在食物中进行如下操作:
对于固体食品,称量25克样品,对于液体食品,称量25毫升样品。将所述部分放入装有225ml蛋白ept水的烧瓶中。混合并匀浆样品。
如果怀疑微生物载量很高,可以进行连续或十进制稀释,以方便计数菌落形成单位(CFU)。
稀释数量取决于样品类型和分析人员的经验。
相反,如果怀疑微生物负荷很低,则无需进行稀释。随后,在选择性培养基上进行亚培养。
对于海产食品,例如贝类,鱼类等,为了寻找霍乱弧菌或其他弧菌,应使用调节至pH 8.5的蛋白ept水(碱性蛋白ept水)。
质量检查
从制备的每个批次中,将一到两个试管在37°C的需氧菌中孵育24小时,不接种。在时间结束时,不应观察到浑浊或颜色变化。
已知的控制菌株也可用于评估其有效性:
为此,可以使用以下细菌菌株:大肠杆菌ATCC 25922,大肠杆菌ATCC 8927,金黄色葡萄球菌ATCC 6538,铜绿假单胞菌ATCC 9027,鼠伤寒沙门氏菌ATCC 1428,肠炎沙门氏菌ATCC 13076。
在所有情况下,都可以预期令人满意的微生物发育,这可以通过培养基的浊度观察到。
局限性
-脱水介质非常吸湿,因此必须远离水分。
-如果发现任何类型的劣化,则不应使用该介质。
-脱水培养基应在10-35°C之间储存
-准备好的培养基必须冷藏(2-8°C)。
参考文献
- Camacho A,Gilles M,OrtegónA,Palau M,Serrano B和VelázquezO。食品微生物分析技术。2009年,第2版。墨西哥国立自治大学化学学院。墨西哥。墨西哥国立自治大学化学学院手册和文件管理员(AMyD)的版本1.可以在以下网站找到:http://depa.fquim.unam.mx
- 大不列颠实验室。自助餐蛋白ept水。2015.可用在:britanialab.com
- Neogen实验室。蛋白ept水。可在以下网站获得:foodsafety.neogen.com
- 大不列颠实验室。蛋白ept水。2015.可用在:britanialab.com
- 默克实验室。缓冲蛋白ept水。可用在:merckmillipore.com
- 康达Pronadisa实验室。碱性蛋白water水。可用在:condalab.com
- 福布斯(Forbes B),萨姆(Sahm D),韦斯菲尔德(Weissfeld)A.(2009)。Bailey&Scott微生物学诊断。12版。社论Panamericana SA阿根廷。