在XLD琼脂或木糖赖氨酸去氧胆酸盐琼脂培养基是用于肠道病原体的分离选择性和差分固体培养。泰勒设计了XL琼脂(木糖,赖氨酸)配方,以改善志贺氏菌属的分离。
他观察到该属在大多数用于分离肠病原的培养基中均受到抑制。随后,加入脱氧胆酸钠,硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵以增加其选择性。该配方已被证明可用于分离志贺氏菌和沙门氏菌。
XLD琼脂上志贺氏菌,沙门氏菌和大肠菌群的菌落差异。A.志贺氏菌,B。沙门氏菌,C。大肠菌。资料来源:A。作者:CDC /阿曼达·摩尔(Amanda Moore,MT);托德·帕克(Todd Parker)博士;奥德拉·马什(Audra Marsh),礼貌:公共卫生图片库B。https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg JJ农民,礼貌:公共卫生图片库
XLD琼脂由酵母提取物,脱氧胆酸钠,木糖,赖氨酸,乳糖,蔗糖,硫代硫酸钠,柠檬酸铁铵,氯化钠,酚红和琼脂组成。XLD琼脂和SS琼脂二重奏在大多数细菌学实验室中用于研究志贺氏菌和沙门氏菌的粪便样本。
其他实验室更喜欢CHROMagar沙门氏菌和XLD琼脂的组合,以及其他可用选项。这些二人组可以在双培养皿中准备。他们将XLD琼脂放在一侧,另一侧选择培养基。
基础
-营养力
XLD琼脂具有酵母提取物,可作为琼脂上生长的微生物的营养物质。此外,碳水化合物(木糖,蔗糖和乳糖)的存在为细菌发酵提供能量。
-介质的选择性
作为一种抑制物质,它呈现脱氧胆酸钠;这样可以防止革兰氏阳性细菌的生长,使培养基具有选择性。
-微分功率
典型的志贺氏菌菌落
如前所述,XLD琼脂含有木糖;除志贺氏菌属外,所有在该培养基中生长的细菌都会发酵这种碳水化合物。
这是使其具有差异性的特征之一,因为志贺氏菌菌落通过形成红色菌落而与其余菌区分开,而其他细菌则产生黄色菌落。
沙门氏菌典型菌落
沙门氏菌属也发酵木糖,最初产生黄色菌落。然而,在耗尽碳水化合物木糖之后,它攻击赖氨酸的酶赖氨酸脱羧酶。赖氨酸的脱羧产生碱,该碱将菌落和周围培养基的颜色变成原始的红色。
这种行为仅由沙门氏菌进行,因为使赖氨酸脱羧的大肠菌无法碱化培养基。这是因为大肠菌群也会发酵存在的乳糖和蔗糖。因此,酸的产生非常高,在这些细菌中留下黄色菌落。
应当指出的是,沙门氏菌属不会发酵蔗糖或乳糖。
H的产生
XLD琼脂还可以检测产生H 2 S的沙门氏菌。为此,它依赖于以硫代硫酸钠为代表的硫源和反应显影剂,即柠檬酸铁铵。
后者与H 2 S(无色气体)反应,形成可见的不溶性黑色硫酸铁沉淀。从这个意义上讲,沙门氏菌菌落的特征将是红色的,中心是黑色。
应当注意,为了发生H 2 S 形成反应,需要碱性pH。这就是为什么形成H 2 S的其他肠杆菌科细菌不能在这种培养基中做到这一点或做得不好的原因,因为通过发酵存在的碳水化合物而产生的高酸度会抑制或阻碍反应。
-氯化钠,琼脂和酚红
最后,氯化钠保持渗透平衡。琼脂是固化剂,酚红可检测pH值变化,从而改变菌落和培养基的颜色。
制备
称量55克脱水XLD培养基,并溶于1升水中。加热并搅拌混合物直至达到沸点。不要过热,因为热量会损坏培养基并产生沉淀,从而改变典型菌落的形态。
该介质不得高压灭菌。溶解时,必须将其放入50°C的水浴中。冷却时,应直接在无菌培养皿中食用。它们可以倒入单板或双板中。它们会凝固并保存在冰箱中直至使用。
使用前先回火。由于它是非无菌介质,因此建议在接近使用日期之前进行准备。
培养基的最终pH应为7.4±0.2。所制备培养基的颜色为橙红色,半透明,无沉淀。
如果您有木糖赖氨酸(XL)琼脂,则可以添加脱氧胆酸钠,硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵。以这种方式,获得了XLD琼脂配方。
应用领域
XLD琼脂用于恢复肠道致病菌,主要是志贺氏菌属,其次是沙门氏菌属。它对评估粪便,水和食物样品很有用。
样品类型
屎
粪便样品可以直接播种在XLD琼脂上,使材料充分分布以获得分离的菌落。
为了提高沙门氏菌的回收率,可以从沙门氏菌富集培养基中划线XLD琼脂。
餐饮
就食品而言,可以使用沙门氏菌和志贺氏菌的浓缩肉汤。对于沙门氏菌,您可以使用亚硒酸胱氨酸肉汤,鲜绿色的四硫代酸盐肉汤等。
对于志贺氏菌,可以用含0.5 µ / ml新霉素的志贺氏肉汤富集,然后在42°±1°C下孵育16-20小时。
水
在水分析中,尤其建议使用膜过滤技术和XLD琼脂的使用。
种植和鉴定条件
将接种的培养基在35°C需氧条件下孵育24至48小时。
观察到每个属的典型菌落,可疑菌落应经过生化测试以鉴定。
质量检查
为了评估培养基的质量控制,可以使用以下细菌菌株:鼠伤寒沙门氏菌ATCC 14028,肠炎沙门氏菌ATCC 13076,黑檀沙门氏菌DSM 4224,弗氏志贺氏菌ATCC 12022,索尼氏志贺氏菌ATCC 25931,大肠杆菌ATCC 25922,变形杆菌ATCC 43071 ,肺炎克雷伯菌ATCC 33495。
沙门氏菌属的特征是在该培养基上呈红色中心,中心呈黑色,或完全呈黑色。而在志贺氏菌属中,菌落必须为红色,即培养基的颜色。
对于大肠埃希氏菌,预期会被完全或部分抑制。如果长大,则菌落是黄色的。对于奇异变形杆菌,在有或没有黑中心的粉红色菌落的情况下,预期生长较差。最终,克雷伯菌属将生长为黄色菌落。
最后的想法
XLD琼脂因其高效率的志贺氏菌回收而广泛用于细菌学实验室,并且沙门氏菌属也具有良好的回收率。
Rall等人(2005年)在其题为“评估三种富集肉汤和五种固体培养基以检测家禽中沙门氏菌的研究”中证明了所测试的三种经典培养基(亮绿色琼脂,SS琼脂和XLD琼脂) ,XLD琼脂的回收率最高。
回收率如下:鲜绿色琼脂为13.8%,SS为27.6%,XLD为34.5%。仅发色培养基超过了回收率达48%的Rambach琼脂和79.3%的CHROMagar。
参考文献
- 食源性疾病。志贺氏菌病。网址:anmat.gov.ar
- “ XLD琼脂。” 维基百科,免费百科全书。UTC 2019年2月9日,11:46。2019年4月10日,19:25 wikipedia.org
- BBL实验室。CHROMagar沙门氏菌/ BD XLD琼脂(双板).2013年可用:bd.com
- Neogen实验室。XLD琼脂。可在以下网址获得:foodsafety.neogen
- Francisco Soria Melguizo实验室。XLD琼脂。可在以下网址获得:http://f-soria.es/Inform
- Rall L,Rall R,Aragon C,SilvaM。评估三种富集肉汤和五种铺板培养基,以检测家禽中的沙门氏菌。布拉兹 J.微生物学。2005; 36(2):147-150。可从以下网站获得:scielo.br
- 福布斯(Forbes B),萨姆(Sahm D),韦斯菲尔德(Weissfeld)A.(2009)。Bailey&Scott微生物学诊断。12版。社论Panamericana SA阿根廷。