所述琼脂沃格尔-约翰逊是固体介质的选择性和差动培养,特别为金黄色葡萄球菌的分离。这种培养基是由沃格尔和约翰逊(Vogel and Johnson)在1960年根据Zebovitz,Evans和Niven在1955年配制的亚碲酸盐甘氨酸琼脂改良而成的。
所述修饰在于增加培养基中存在的甘露醇的浓度和掺入pH指示剂。当前配方由三肽,酵母提取物,甘露醇,磷酸氢二钾,氯化锂,甘氨酸,酚红,琼脂,1%碲酸钾溶液和水组成。
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应当指出,还有其他一些介质,如沃格尔-约翰逊琼脂,对分离金黄色葡萄球菌具有选择性,例如咸甘露醇琼脂和贝尔德·帕克琼脂。从这个意义上讲,可以说Vogel-Johnson琼脂的基础是咸甘露醇琼脂和Baird Parker琼脂的混合物。
首先,通过发酵甘露醇并将pH指示剂变为黄色来区分金黄色葡萄球菌菌落。另一方面,在第二种中,金黄色葡萄球菌的特征在于将亚碲酸盐还原为碲,并形成灰色至黑色菌落。两种性质均在Vogel-Johnson琼脂中观察到。
与其他介质一样,这种介质可用于检测食品样品,工业产品的卫生控制和临床样品中的金黄色葡萄球菌。
基础
营养供应
Vogel-Johnson培养基含有三丁酸和酵母提取物;两种物质均提供长链氨基酸,这些氨基酸可作为细菌生长所需的碳和氮源。能够在这种培养基中生长的细菌将从这些物质中吸收营养。
选择力
Vogel-Johnson琼脂能够抑制革兰氏阴性菌甚至某些革兰氏阳性菌的生长,有利于凝固酶阳性葡萄球菌的发展。抑制物质是亚碲酸钾,氯化锂和甘氨酸。
差分功率
构成这种差异培养基的物质是甘露醇和亚碲酸钾。甘露醇是一种碳水化合物,发酵后会产生酸,使培养基从红色变为黄色,这是由于存在红色酚pH指示剂而发生的。
而无色亚碲酸盐还原为游离金属碲后,则呈深灰色至黑色。
金黄色葡萄球菌发酵甘露醇并将亚碲酸盐还原为碲。因此,该培养基中金黄色葡萄球菌的典型菌落是灰色或黑色,并被黄色培养基包围。
在这种培养基中生长且不会还原亚碲酸盐或发酵甘露醇的细菌将形成透明菌落,被红色培养基包围,由于使用蛋白ept对培养基进行碱化,其颜色甚至比原始颜色更浓。
另一方面,减少亚碲酸盐但不发酵甘露醇的细菌将以深红色培养基包围的灰色或黑色菌落生长。
如果在不添加亚碲酸钾的情况下制备培养基,则金黄色葡萄球菌菌落会发展为黄色菌落,并被黄色培养基包围,就像在咸甘露醇琼脂中一样。
渗透平衡和固化剂
磷酸氢二钾可保持培养基的渗透平衡,并将pH值调节至中性7.2。而琼脂使培养基具有固体稠度。
制备
碲酸钾溶液1%w / v
该溶液不包含在脱水介质中,因为它无法在高压釜中灭菌。因此,需要单独准备并将其添加到已灭菌的介质中。
一些商品房出售现成的1%碲化钾溶液。如果要在实验室中进行准备,请按照下列步骤操作:
称出1.0克亚碲酸钾,并测量100毫升蒸馏水。将碲化钾溶解在一部分水中,然后加水直至达到100毫升。通过过滤法将溶液灭菌。
Vogel-Johnson琼脂基础培养基
称出60克脱水培养基,并溶于1升蒸馏水中。将混合物加热至沸腾以帮助完全溶解。在溶解过程中,经常搅拌介质。
在15磅压力和121°C的高压釜中灭菌15分钟。从高压釜中取出,使其静置直至介质达到约45至50°C的温度。加入20毫升先前准备的1%碲酸钾溶液。
混合并倒入无菌培养皿中。使其固化并倒置在板支架上,以便以后存放在冰箱中直至使用。
制得的培养基的最终pH应为7.2±0.2。
在播种样品之前,请等待板达到室温。
所制备培养基的颜色为红色。
用
尽管它可用于分离任何类型样品中的金黄色葡萄球菌,但它主要用于药物产品,化妆品和食品的微生物分析。
建议接种物要密实。播种可以通过用铂金手柄划痕或用Drigalski刮刀在表面上进行。
将平板在35-37°C下进行24至48小时的需氧培养。
质量检查
以下控制菌株可用于在Vogel-Johnson培养基上进行质量控制:
金黄色葡萄球菌ATCC 25923,金黄色葡萄球菌ATCC 6538,表皮葡萄球菌ATCC 12228,大肠杆菌ATCC 25922或奇异变形杆菌ATCC 43071。
预期结果如下:对于金黄色葡萄球菌菌株,生长令人满意,黑色菌落被黄色培养基包围。对于表皮葡萄球菌,有规则的生长,半透明或黑色菌落被红色培养基包围。
同样,预期对大肠杆菌的完全抑制,以及对变形杆菌的部分或完全抑制。如果它长大,它将很少这样做,菌落将是黑色的,周围是红色。
参考文献
- BD实验室。VJ(Vogel和Johnson Agar)。2006年可用:bd.com
- 大不列颠实验室。Vogel- Johnson Agar。2015.可用在:britanialab.com
- 大不列颠实验室。碲化钾。2015.可用在:britania.com
- Himedia实验室。沃格尔-约翰逊琼脂培养基。2018年可用:himedialabs.com/TD/MU023.pdf
- 沃格尔-约翰逊琼脂基地。默克微生物手册。第12版,第502-503页。可从以下位置获得:用户/团队/下载
- Wikipédia的贡献者,“ÁgarVogel Jonhson”,Wikipédia免费的百科全书,可在wikipedia.org上找到。
- 委内瑞拉标准Covenin 1292-89。(1989)。食品。金黄色葡萄球菌的分离和计数。可用在:sencamer.gob.ve