TSI AGAR：理论依据，制备方法和用途 - 生物学 - 2025

的TSI琼脂或三糖铁琼脂是用作固体培养基一个生化试验，以指导革兰阴性杆菌的初始识别。它基于显示存在的糖的发酵以及硫化氢和气体产生的结果。

它的组成和基础与Kligler铁测试非常相似，区别在于后者仅包含葡萄糖和乳糖。相反，顾名思义，三糖铁琼脂包含三种可发酵的碳水化合物：葡萄糖，乳糖和蔗糖。

用不同微生物进行的TSI测试的图像A.大肠杆菌，B。志贺氏杆菌，C）鼠伤寒沙门氏菌，D。绿脓杆菌。来源：Witmadrid，来自Wikimedia Commons

此外，TSI培养基具有四种蛋白质衍生物，使其非常有营养，琼脂：酵母提取物，肉提取物，蛋白ept和蛋白p。它还包含硫酸亚铁铵，硫代硫酸钠，氯化钠，酚红和琼脂。

微生物无法发酵培养基中存在的葡萄糖立即将其排除在肠杆菌科之外。因此，该测试对于决定采用哪种鉴定途径确定属和种至关重要。

每个实验室决定是使用TSI琼脂还是使用Kligler铁琼脂。

基础

每种化合物都在培养基中发挥作用。

氯化钠和琼脂

氯化钠对于维持培养基的渗透平衡是必需的。而琼脂给出了坚实的一致性。

PH指示剂（酚红）

所制备培养基的pH平衡在7.3，pH指示剂（酚红）在6.8以下变为黄色。这意味着糖类发酵产生的少量酸会将培养基从橘红色变成黄色。

如果不进行发酵，则通过使用蛋白ept将使培养基碱化，从橘红色变为强红色。

蛋白衍生物（酵母提取物，肉提取物，蛋白ept和蛋白p）

当细菌代谢TSI琼脂中存在的蛋白质时，会产生胺，从而使培养基碱化（主要是在斜面水平），因为该反应需要氧气。胺将挡板变成鲜红色。

但这将取决于细菌发酵碳水化合物与否的能力。

碳水化合物（葡萄糖，乳糖和蔗糖）的发酵

对糖的发酵的研究可以给出几个图像，并且每个图像都有不同的解释。测试解释将微生物分为三类：葡萄糖非发酵剂，乳糖非发酵剂和乳糖/蔗糖发酵剂。

应当注意的是，培养基中的葡萄糖量是有限的，而乳糖和蔗糖的浓度则高10倍。

肠杆菌科细菌和其他葡萄糖发酵微生物将开始发酵这种糖，因为它是最简单的能量碳水化合物。

另一方面，乳糖和蔗糖是复杂的碳水化合物，必须分解才能转化为葡萄糖，以使其进入Embden-Meyerhof循环。

-微生物不发酵葡萄糖

当被接种的微生物无法发酵葡萄糖时，它能够发酵其他碳水化合物的数量将大大减少。因此，这里没有形成酸，但是通过使用蛋白one在斜面中形成了胺。

在这种情况下，边框变成更深的红色，并且管的底部可能保持不变，也可能被碱化，从而使整个管变成红色。

解释：K / K表示碱性斜面/碱性或中性底部

在文章开头的图像中，看到管D的图像。

该结果表明该微生物不属于肠杆菌科。

-微生物不发酵乳糖/蔗糖

如果细菌能够发酵葡萄糖而不是乳糖或蔗糖，那么将发生以下情况：

细菌会在大约6至8个小时后消耗掉所有存在的葡萄糖，从而能够酸化斜面和块体。也就是说，琼脂将完全变成黄色。但是，当葡萄糖耗尽并且不能使用乳糖和蔗糖时，细菌将开始蛋白质的代谢。

该反应需要氧气，因此蛋白ept的降解发生在表面（斜面）上。产生的胺碱使边框从黄色变为红色。孵育18至24小时后，可证明该反应。

解释：K / A表示碱性斜角和酸性一团。

在文章开头的图像中，看到管B的图像。

-乳糖/蔗糖发酵微生物

能够发酵乳糖和蔗糖的微生物可以明显地发酵葡萄糖。耗尽培养基中存在的最小量的葡萄糖后，形成的丙酮酸开始通过有氧克雷布斯循环代谢为酸，在8至12个小时内，所有培养基均为黄色。

如果细菌能够分解乳糖或蔗糖，则将继续产生酸，并且18至24小时后，整个管子（斜角和塞子）将继续变黄。

应当注意，葡萄糖的使用有两种方式：一种是有氧地在管的斜面上，另一种是无氧的在管的底部。

解释：A / A表示酸性斜面/酸性残渣。它可能有也可能没有气体。

在文章开头的图片中，看到管A的图片。

产气量

一些微生物能够在糖的发酵过程中产生气体。气体通过琼脂内的压力在管中得到证明。压力会导致气泡形成或琼脂移位。有时，气体的形成会使介质破裂。

重要的是，在播种TSI培养基时，要从琼脂的中央干净地刺穿直至到达底部。如果穿刺朝向管壁转移，则会导致气体产生假阳性，因为它将通过错误形成的通道逸出。

气体产生以及琼脂斜面中发生的反应都需要氧气，因此建议将试管用棉塞覆盖，如果使用电木帽，则不要完全拧紧。

产气量报告为正（+）或负（-）。

气体形成模式。资料来源：理学硕士课程。Marielsa Gil。图片来源：VeeDunnFlickr.com/Y_tambe，通过Wikimedia Commons

硫代硫酸钠和硫酸亚铁铵

能够产生硫化氢（无色气体）的细菌吸收了培养基中存在的硫代硫酸钠中的硫。一旦形成H ₂ S，它就会与硫酸亚铁铵反应，生成硫化铁（清晰可见的黑色沉淀物）。

据报道，H ₂ S的产生为正（+）或负（-）。

在本文开头的图像中，看到管C的图像。

制备

称重62.5 g脱水三糖铁琼脂（TSI）培养基，并溶于一升蒸馏水中。

加热直至琼脂完全溶解。煮一分钟，经常搅拌。将4 ml培养基分配到带棉帽的13/100试管中。

在121℃的高压釜中灭菌15分钟。从高压釜中取出，使其倾斜放置。必须注意底座和挡板的距离相同。

存储在2-8°C的冰箱中。在播种细菌菌株之前先使其升温。

脱水介质的颜色为浅米色，制得的介质为红橙色。

所制备培养基的最终pH为7.3±0.2。

应用领域

TSI测试在微生物实验室一级被广泛使用。该测试对于指导为了识别属和种而必须进行的测试类型至关重要。其良好的执行力和解释力可以节省材料和劳力。

如果结果为TSI K / K且细胞色素氧化酶测试为阳性，则已知应使用测试来鉴定非发酵革兰氏阴性棒，例如假单胞菌，产碱菌，无色杆菌，伯克霍尔德菌等。如果它是氧化酶阴性，则将其定位为不动杆菌属，嗜单胞菌等。

另一方面，如果获得TSI A / A或K / A且细胞色素氧化酶测试结果为阴性，则硝酸盐还原为亚硝酸盐的比例就更多，我们可以肯定这是属于肠杆菌科的一种微生物。在这种情况下，识别途径将集中在针对这组细菌的特定测试上。

另一方面，如果获得了K / A或A / A图像并且细胞色素氧化酶检测呈阳性，则将要组装的其他检测将用于鉴定不属于肠杆菌科的发酵菌株，例如：气单胞菌，弯曲菌，弧菌和巴斯德氏菌。

具有硫化氢，氧化酶阴性的TSI将指导肠杆菌科以下属的鉴定：变形杆菌，柠檬酸杆菌，爱德华氏菌，小球藻，Pragia，曲布氏菌或沙门氏菌。

在具有碱性背景的碱性斜面中具有很少或中等硫化氢的TSI和正氧化酶将指导使用测试来鉴定非发酵型产生H ₂ S的革兰氏阴性棒，例如恶臭希瓦氏菌。

最后，TSI可用于研究革兰氏阳性细菌中硫化氢的产生，尤其是在怀疑疑似丹毒的丹参。

播种

TSI培养基必须接种在原代或选择性培养物中分离的纯菌落。如果菌落取自接种了混合菌群样品的选择性培养基，则应注意仅从表层取菌，因为在该培养基中受抑制的活菌株可能存在于菌落的下部。

因此，切勿将环在选择培养基上冷却，然后将菌落吸收并用TSI培养基接种。

播种将使用直圈或针进行。将打孔，注意要穿过中间的中心直到到达底部，然后通过以锯齿形接种表面来完成播种。不要做两次穿刺。

在需氧条件下于37°C孵育18-24小时。此时，无论之前还是之后，都需要解释。

局限性

孵育后18到24小时内应阅读TSI测试。在此之前的读数可能会给A / A发酵带来假阳性。然而，此后的读数可能会由于消耗使培养基碱化的蛋白one而引起非发酵剂的假阴性图像。

参考文献

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