所述琼脂胰蛋白胨大豆或胰胨豆胨琼脂是固体培养基和营养非选择性。它以字母TSA命名,其英文缩写为Trypticase Soy Agar。它由三肽,大豆蛋白ept,氯化钠和琼脂组成。
由于其高营养能力,因此非常适合中等需求和非需求微生物的培养。不推荐将不含其他补充剂的培养基用于原代培养,但除其他用途外,对于纯菌株的继代培养和使其存活非常有用。
胰蛋白水解酶大豆琼脂楔入带有胶木帽的试管中。资料来源:作者MSc摄。Marielsa Gil。
而且,这种琼脂可作为制备诸如血琼脂之类的富集培养基的基础,尤其是当需要观察溶血模式并安装光喹啉和杆菌肽类群时,分别是诊断肺炎链球菌和化脓性链球菌所需要的。
另一方面,当与抗生素结合使用时,从具有混合菌群的样品中分离出临床上重要的兼性和严格厌氧微生物是有用的。
最后,胰蛋白酶大豆琼脂的组成及其性能符合不同药典(欧洲,日本和北美)确定的要求。
基础
为了使细菌正确发育,必须存在能量供应,例如氨基酸,维生素,嘌呤和嘧啶碱基。
从这个意义上讲,三叉蛋白和大豆蛋白ept可为微生物提供这些营养,从而使其充分发育。但是,对于挑食性细菌,有必要在琼脂中添加去纤维化血液或温热血液以增加其富集度。
另一方面,如果将抗生素添加到培养基中,它将成为选择性培养基。还可以添加0.6%的酵母提取物以利于分离李斯特菌属,而添加胱氨酸亚碲酸盐和羔羊血是双歧杆菌的理想选择。
最后,氯化钠为培养基提供了渗透平衡,琼脂提供了固体稠度。
制备
胰蛋白酶大豆琼脂板
要制备胰蛋白tic大豆琼脂,应在数字秤上称量40 g脱水的商业培养基。将其溶于装有烧瓶的一升蒸馏水中。
将该混合物静置5分钟,然后将其带至热源以帮助溶解介质。应经常搅拌并煮沸1至2分钟。随后,将介质在高压釜中于121°C灭菌15分钟。
冷却至50°C,并分配到无菌培养皿中。允许固化,倒置,按顺序放置在斑块中,然后储存在冰箱中。
培养基的最终pH应为7.3±0.2。
应当注意的是,脱水培养基的颜色是浅米色,应在10至35°C的干燥环境中保存。
就其本身而言,准备好的琼脂为浅琥珀色。准备好的板应保存在冰箱(2-8°C)中,直到使用。
平板在使用前必须达到室温。
胰胰蛋白酶大豆琼脂板补充血液
血琼脂是通过在将胰蛋白酶素大豆琼脂冷却至50°C时添加5%的去纤维化血液来制备的。通过轻柔旋转使混合物均质化。
服务于无菌培养皿中。中间颜色应为樱桃红色。
胰蛋白酶大豆琼脂平板补充温血
要制备基于TSA的血琼脂,请按照已描述的步骤进行操作,但是在离开高压釜时,将其静置直至培养基温度大约在56至70°C之间。那时血液被放置并混合直到培养基变成棕色。
服务于无菌培养皿中。介质的颜色是巧克力棕色。
胰蛋白酶大豆琼脂楔
琼脂的制备步骤与平板所描述的相同,不同之处在于,在灭菌之前,将培养基分配在带有胶木盖的试管中10到12毫升,而不是在培养皿中使用。
随后,将管在121℃下高压灭菌15分钟。当他们离开时,他们会在支持的帮助下倾斜并得以巩固。
所制备的楔形物按表面积播种,用于使某些非需求性微生物在指定时间内存活。
应用领域
在以下情况下使用胰蛋白酶大豆琼脂:
-作为制备通常在大多数实验室中使用的经典血琼脂的基础。
-分离高要求的细菌。
-观察溶血模式。
-执行诊断测试。
-用半胱氨酸亚碲酸盐和羔羊血制备双歧杆菌专用血琼脂的基础。
-作为制备羔羊血琼脂的基础,加卡那霉素-万古霉素用于厌氧菌尤其是拟杆菌的生长。
-用于维持不要求的菌株(细菌)。
-有氧微生物计数,用于研究水,环境,食品和化妆品样品的微生物极限。
播种
可以将样品直接播种在补充有血液或其他添加剂的胰蛋白酶大豆琼脂表面上。它被用尽了。
而没有添加剂的胰蛋白酶胰蛋白酶大豆琼脂平板通常用于传代微生物菌株(细菌或酵母菌)。
质量检查
无菌控制
要检查用胰蛋白酶大豆大豆琼脂制备的不同培养基的无菌性,建议采取以下措施:每批制备的1或2个未接种的平板或试管应在37°C下孵育24小时以证明其无菌性。在任何情况下,它都必须保持不增长。
如果发现污染,则必须丢弃整个批次。
生长控制
下列细菌菌株可用于研究胰蛋白酶处理的大豆琼脂的正常功能:大肠杆菌ATCC 8739,金黄色葡萄球菌ATCC 6538,铜绿假单胞菌ATCC 9027和粪肠球菌ATCC 29212。
接种菌株并在37℃下需氧培养24小时。
在所有情况下,增长都必须令人满意。
也可以使用白色念珠菌复合物ATCC 10231和黑曲霉ATCC 16404等真菌,两种菌株均有望良好生长。
胰蛋白酶补充大豆琼脂的生长控制和溶血模式
为了验证用该碱制备的血琼脂的正常功能,可以使用以下菌株:化脓性链球菌ATCC 19615,肺炎链球菌ATCC 6305和肺炎链球菌ATCC 49619。
将它们接种并在37℃微需氧度下培养24小时。
在所有情况下,生长都应令人满意,考虑到在化脓性链球菌中应观察到β-溶血(菌落周围的光晕),在两种肺炎链球菌中均应观察到α溶血(菌落周围的绿色光晕)。群落)。
参考文献
- 维基百科的贡献者。胰蛋白酶我是琼脂。维基百科,免费百科全书。2018年12月17日,15:47 UTC。可在以下网址获得:https://en.wikipedia.org
- 大不列颠实验室。雷公藤大豆琼脂。2015.可用在:britanialab.com
- Neogen实验室。胰蛋白酶大豆琼脂。可在以下网站获得:foodsafety.neogen.com
- 福布斯(Forbes B),萨姆(Sahm D),韦斯菲尔德(Weissfeld)A.(2009)。Bailey&Scott微生物学诊断。12版。阿根廷。社论Panamericana SA
- BD实验室。胰蛋白酶我是琼脂。2014年可用:.bd.com