的甘露糖醇盐琼脂或甘露醇盐是固体培养基选择性和差动培养。它是由查普曼(Chapman)创建的,用于分离致病性革兰氏阳性球菌,尤其是金黄色葡萄球菌。
但是,分离表皮葡萄球菌(有时可以作为机会病原体存在)和腐殖葡萄球菌(一种公认的泌尿病原体)以及其他物种也很有用。
A.制备了咸甘露醇琼脂培养基的Fiola。B.接种有发酵和非发酵甘露醇细菌菌株的盐化甘露醇琼脂平板。资料来源:A和B:作者MSc拍摄的照片。Marielsa Gil。
一些肠球菌和某些革兰氏阳性孢子形成棒能够在这种培养基上生长。
这种介质在临床样品分析中非常有用,但也可用于食品的微生物学研究以及工业产品的质量控制,例如化妆品,药品等。
咸的甘露醇琼脂由牛肉,三丁酸,甘露醇,氯化钠,酚红和琼脂的提取物和蛋白p组成。
基础
甘露醇琼脂具有较高的盐分含量,因此具有选择性。盐度起抑制作用,并阻止革兰氏阴性细菌的生长。
由于存在碳水化合物甘露醇和酚红pH指示剂,因此也存在差异。由此,能够发酵甘露醇的细菌产生酸,使培养基酸化,使菌落和培养基变黄。
另一方面,不发酵甘露醇的菌落在培养基中生长,吸收了肉类提取物,蛋白ept和三叉蛋白提供的营养。细菌从那里提取生长所需的碳,氮,维生素和矿物质。
在这种情况下,菌落可以是弱的或强的粉红色,并且培养基保持相同的颜色或变为紫红色。
琼脂是为培养基提供一致性的物质。
制备
为了制备一升咸甘露醇琼脂,称重111g来自优选商业公司的脱水培养基,并使用烧瓶将其溶解在1000ml蒸馏水中。
在频繁搅拌介质的情况下加热,以改善溶解过程。煮一分钟。
将烧瓶在121℃的高压釜中放置15分钟。
最后,将小瓶从高压灭菌器中取出,使其静置,并在温度大约为50至55°C时在无菌陪替氏培养皿中盛装15至20 ml。
使其固化,以倒空的顺序放置在匾中,并保存在冰箱中直至使用。在播种样品之前,等待板达到室温。
通过划线或用drigalski刮刀进行表面接种来接种板。制备的培养基的最终pH必须为7.4±0.2
脱水介质的颜色为浅米色,制备的介质的颜色为橙红色。
应用领域
由于其高选择性,这种培养基非常适合用于播种带有混合菌群的样品,在其中需要寻找金黄色葡萄球菌作为该属的主要病原体。
从这个意义上说,其最常使用的方法之一是对咽部分泌物和鼻分泌物进行微生物分析,尤其是检测无症状的金黄色葡萄球菌携带者。
一些国家已将这种分析作为对要担任食品供应商的人们的强制性要求。
这种控制防止了金黄色葡萄球菌携带者的感染,从而避免了因食用被葡萄球菌肠毒素污染的食物而引起的大量食物中毒。
它也可以包括在伤口感染,血液培养,CSF,支气管肺泡灌洗等种子中。
腌制的甘露醇琼脂可用于从CLED琼脂或血琼脂的尿培养物中重新分离菌落,而CLED琼脂或血琼脂的革兰氏阳性菌群呈革兰氏阳性。
它在食品,饮用水,土壤等微生物分析中也有效。
质量检查
一旦准备好一批带有咸甘露醇琼脂的平板,建议进行质量控制。播种对照菌株以显示是否有生长。
已知的金黄色葡萄球菌菌株可以用作阳性对照。它应该可以令人满意地生长,形成黄色菌落,并且培养基也变成相同的颜色。
同样,包括已知的表皮葡萄球菌菌株也很方便。它可以令人满意地生长为粉红色菌落,并且培养基保持相同的颜色或变深为更深的粉红色。
作为阴性对照,使用了不应在该培养基上生长的菌株。例如,可以生长已知的大肠杆菌或肺炎克雷伯菌菌株。预期结果是完全抑制,即没有生长。
另外,必须孵育未接种的板。在其中不应有任何增长或颜色变化。
重要的是,如果有变质迹象,例如污染,脱水,变色等,则不要使用该板。
最后的想法
使用咸甘露醇琼脂培养基时,需要考虑一些重要方面:
-获得黄色菌落的生长并不表示它是金黄色葡萄球菌。必须记住,某些肠球菌菌株能够在这种培养基中生长并发酵甘露醇,以及某些形成孢子的革兰氏阳性棒。
因此,在菌落上进行革兰氏菌和过氧化氢酶测试非常重要。
-另一方面,必须考虑到除了金黄色葡萄球菌以外的其他葡萄球菌也能发酵甘露醇。因此,重要的是将菌落继代培养成营养肉汤,以从那里取下来并进行凝固酶测试。
在对甘露醇发酵对人具有临床重要性的葡萄球菌中,有:金黄色葡萄球菌,模拟葡萄球菌,Capitis ssp capitis,S.capitis ssp urelyticus,S。xylosus,S。cohnii ssp urelyticusum等。
其他人可能会做出不同的反应,即有时是积极的,有时是消极的。一些是腐生链球菌,溶血链球菌,华氏链球菌,中间链球菌等。
-不建议直接从甘露醇琼脂中提取菌落来进行凝固酶检测,因为培养基中高浓度的盐会干扰结果。
-最后,由于某些金黄色葡萄球菌菌株可以缓慢发酵甘露醇,因此建议将含甘露醇的平板孵育最多48小时,尽管这种情况并不常见。
参考文献
- 大不列颠实验室。咸甘露醇琼脂。2015.可用在:britanialab.com
- “咸甘露醇琼脂”。维基百科,免费百科全书。世界标准时间2018年10月31日19:08。2019年1月17日,20:55,可从以下网站获取:es.wikipedia.org。
- Koneman E,Allen S,Janda W,Schreckenberger P,Winn W.(2004年)。微生物学诊断。(第5版)。阿根廷,社论Panamericana SA
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- BD实验室。BD甘露醇盐琼脂。2013.在以下网址提供:bd.com。