SABOURAUD琼脂：基础，制备和用途 - 生物学 - 2025

的琼脂沙氏，也称为沙氏葡萄糖琼脂，是一种固体介质，特别是富含隔离和真菌的发展，如酵母，霉菌和皮肤癣菌。

因此，在微生物学实验室中不能缺少这种培养基来研究来自临床或非临床样品的致病性或机会性真菌的存在。同样，它对于丝状细菌（如链霉菌和诺卡氏菌）的生长也是理想的。它的用途非常广泛，因为它可以用于人类，动物，植物和工业真菌学。

A.未播种的Sabouraud琼脂。B.撒有酵母的沙伯氏琼脂。资料来源：作者MSc拍摄的照片。玛莉莎·吉尔（Marielsa gil）

这种培养基是由著名的皮肤科医生Raimond Sabouraud于1896年创建的，他成为世界知名的主要由皮肤癣菌引起的头皮疾病专家。

它的创建是如此重要，以至于从那时起一直使用到今天，尽管进行了一些修改。

尽管它对真菌特别有用，但是细菌可以在这种培养基中生长，因此，对于具有混合菌群的样品，需要在其制备过程中加入抗生素以抑制可能存在的细菌菌群的生长。

必须谨慎选择抗生素，并要考虑到要回收的真菌类型，因为某些抗生素在某些物质存在下会被抑制。

基础

Sabouraud右旋糖琼脂是一种培养基，由于其酸性pH值为5.6±0.2，因此在其原始配方中具有较弱的选择性，但是细菌仍然可以形成，主要是在长时间的孵育中。

该培养基含有酪蛋白p和动物组织的胰腺消化物，它们为微生物的生长提供了碳和氮的来源。

它还含有高浓度的葡萄糖，作为能量来源，可促进真菌在细菌上方的生长。所有这些都与琼脂混合，琼脂是一种赋予其正确一致性的成分。

另一方面，如果添加抗生素，则沙伯氏葡萄糖琼脂可以是选择性的。

使用抗生素时，它尤其适用于伤口，开放性溃疡或怀疑有严重细菌污染的任何样品。

Sabouraud葡萄糖琼脂与抗生素的最常用组合

-Saburaud琼脂和氯霉素：非常适合回收酵母和丝状真菌。

-含有庆大霉素和氯霉素的沙伯氏琼脂：几乎所有丝状真菌和酵母都在这种培养基中生长，并且它抑制包括肠杆菌科，假单胞菌和葡萄球菌在内的大量细菌。

-带有环己酰亚胺的Sabouraud琼脂：只要怀疑是双态真菌，它对皮肤或呼吸道样品特别有用。

环己酰亚胺应谨慎使用；尽管它用于抑制非致病性或环境性真菌和可能以污染物形式存在于样品中的酵母菌的生长，但它也抑制某些真菌的生长，例如新隐球菌，烟曲霉，波氏Allescheria boydii，青霉菌和其他机会性真菌。

-Sabouraud琼脂与氯霉素加环己酰亚胺：主要用于分离皮肤真菌和二形真菌。它的缺点是它会抑制某些机会性真菌，例如白色念珠菌，曲霉，合酶菌或新孢梭菌。

-含有氯霉素，链霉素，青霉素G和环己酰亚胺的Sabouraud琼脂：非常适合被细菌和腐生真菌高度污染的样品，但除了上述机会性真菌外，它还具有抑制放线菌和诺卡氏菌生长的缺点。

制备

如果单独使用成分，则可以按以下步骤进行准备：

Sabouraud葡萄糖琼脂

衡量：

-40克葡萄糖

-10克蛋白ept

-15克琼脂

-量取1000毫升蒸馏水

混合所有成分，将pH调节至5.6。溶质通过煮沸溶解，将20 ml介质分配到25 x 150 mm的试管中，该试管没有边缘，最好带棉帽。

带棉帽的试管。资料来源：作者MSc摄。玛莉莎·吉尔（Marielsa gil）

根据可用性，还可以使用其他尺寸的管。

将它们在压力（121°C）的环境中高压灭菌10分钟。不应超过高压灭菌时间。离开高压釜时，试管在支撑的帮助下倾斜，直到在长笛喙中固化。

另一种方法是通过加热使成分溶解直至沸腾。在同一小瓶中高压灭菌10分钟，然后在培养皿中分配20 ml。

如果您的Sabouraud葡萄糖琼脂培养基已经包含所有成分，请继续称重商业公司为一升水指定的量。其余步骤与上述步骤相同。

Sabouraud葡萄糖琼脂（修饰表情）

衡量：

-20克葡萄糖

-10克蛋白ept

-17克琼脂

-量取1000毫升蒸馏水

混合所有成分，将pH调节至6.9。与前面的情况相同。

有商业房屋提供所有成分的培养基。在这种情况下，请按照插件上的说明进行称重和准备。

Sabouraud右旋糖琼脂（修饰氨基酸）与氯霉素

氯霉素原液

-称取500毫克氯霉素碱

-量取100 ml 95％的乙醇

-混合

如先前所述制备Sabouraud右旋糖琼脂培养基（Emmons），并且在高压灭菌之前，对于每升培养基，添加10ml氯霉素储备溶液。

Sabouraud Emmons琼脂与环己酰亚胺

环己酰亚胺储备溶液

-称取5克环己酰亚胺

-量取100毫升丙酮

-混合

如已经描述的制备沙伯氏葡萄糖琼脂培养基（Emmons），并且在高压灭菌之前，对于每升培养基，添加10ml的环己酰亚胺储备溶液。

Sabouraud葡萄糖琼脂（Emmons）与氯霉素和环己酰亚胺

如前所述制备Sabouraud葡萄糖琼脂培养基（Emmons），并且在高压灭菌之前，对于每升培养基，添加10ml的氯霉素储备溶液和10ml的环己酰亚胺储备溶液。

可以添加的其他抗生素

每升培养基中有20,000至60,000单位青霉素。

每升培养基30毫克链霉素。

在将介质高压灭菌后，将其稍加冷却（50-55°C），必须将两者都加入。

每升培养基0.04 g新霉素。

每升培养基0.04克庆大霉素。

特别注意事项

为了安全起见，最好将Sabouraud葡萄糖琼脂撒在楔形管（倾斜于长笛喙）中，而不是在陪替氏培养皿中播种，以避免孢子散布和吸入。

重要的是Sabouraud琼脂试管要用棉花覆盖，而不要用螺帽盖住，因为已证明半厌氧条件会抑制某些菌株（如球孢子虫炎）中的孢子形成。另外，大多数真菌都是有氧的。

如果使用螺帽，请勿密闭。

质量检查

准备好的介质必须经过质量控制，以验证其功能是否正常。为此，播种了某些控制菌株。

对于含有氯霉素的Sabouraud葡萄糖琼脂，可以使用白色念珠菌的ATCC菌株，该菌株必须具有出色的生长能力。另一板接种有必须完全抑制的大肠杆菌菌株。

还应孵育未接种的平板，其中不得培养任何微生物。

对于含有氯霉素和环己酰亚胺的Sabouraud葡萄糖琼脂，可以使用薄荷毛癣菌菌株，它们应发育良好。另一板接种黄曲霉菌株，其中必须很少或没有生长。另外，将未接种的板温育以证明其无菌性。

对于带有环己酰亚胺的沙氏葡萄糖琼脂，使用白色念珠菌，红毛癣菌或犬小孢子菌的菌株，它们必须表现出良好的生长。

同样，包括一株黄曲霉菌株，显示出很少或没有生长。最后，孵育未接种的板以控制无菌性。

应用领域

初级文化

经典的Sabouraud右旋糖琼脂包含4克右旋糖，作为主要的分离培养基非常出色，因为它显示了每种真菌的特征形态。

它也非常适合展示颜料的生产。但是，它不是观察孢子形成的最佳方法。

也不建议用于培养皮肤高芽孢杆菌，因为高浓度的葡萄糖会抑制它。

另一方面，耕种必须考虑某些因素。

一些真菌在室温下生长最佳，例如霉菌，其他真菌在37°C下成功生长，例如一些酵母菌，而其他一些真菌在两种温度下均可生长（双态真菌）。

出于这个原因，有时需要对同一样品使用多个Sabouraud琼脂平板，因为通常需要重复接种才能在室温下孵育一个平板，在37°C下孵育另一个平板。

例如，将Sporothrix schenckii播种在两个板上。一种在室温下孵育以获得霉菌相，另一种在37°C孵育以获得酵母相，但在后者中，必须向培养基中添加5％的血液。

在其他情况下，例如菌丝瘤样品，播种两个Sabouraud琼脂平板，一个用氯霉素，另一个用环己酰亚胺。第一种将使真菌起源的真菌病原体（真菌病）生长，而第二种使细菌而引起的真菌病原体（例如放线菌瘤）的生长。

孢子形成

Emmons改良的Sabouraud葡萄糖琼脂包含2克葡萄糖，不仅用于分离，还用于孢子形成和保存。

在这种培养基中，可以回收皮肤芽孢杆菌的菌株。

保护

为了保存蘑菇培养物，可以将它们保存在冰箱（2-8°C）中。保存时间可以在2到8周之间变化。在这段时间之后，必须对其进行传代培养以重复该过程。

一些真菌在室温下保持最佳状态，例如：表皮藻，毛癣菌，紫锥菌和小孢子菌。

如果右旋糖完全从琼脂中除去，并且培养基中琼脂的量减少以避免干燥，则可以延长菌株的维持以避免多态性。

微文化

为了鉴定某些丝状真菌，有必要使用Sabouraud琼脂或其他特殊方法进行微培养，以观察有性和无性生殖的结构。

在人类真菌学中

它主要用于诊断真菌疾病，尤其是那些影响皮肤及其附件（头发和指甲）的疾病。

样品可以是分泌物，分泌物，皮肤，头发，指甲，痰，CSF或尿液。常见的病原体是皮肤真菌，引起皮下和全身性真菌病的真菌。

动物真菌学

动物通常受到真菌感染的影响，因此Sabouraud琼脂在动物真菌学中的作用与在人类中一样有用。

例如，皮肤癣菌通常可以影响动物。犬微孢子菌就是这种情况，它经常感染狗，猫，马，猪和猴子。同样，小孢子石膏感染狗，猫和家畜。

鸡，公鸡和鸡等鸟类受鸡小孢子菌的影响。

其他真菌，例如Zymonema farciminosum，也是动物（主要是马，mu子和驴）的病因，在淋巴管中产生明显的炎症。

Sporothrix schenkii和荚膜组织胞浆菌影响家畜和人类。

环境真菌学

许多病原性或机会性真菌可以在给定的时间在给定的环境中集中，尤其是在手术室以及诊所和医院的重症监护室（ICU）中。因此，有必要对其进行控制。

其他易受伤害的空间是图书馆和老建筑，它们可能会受到环境真菌浓度的影响。

在环境研究中，Sabouraud葡萄糖琼脂用于分离真菌。

工业真菌学

研究化妆品，食品，饮料，皮革，纺织品等中的真菌污染时，不能缺少沙氏葡萄糖琼脂。

植物真菌学

植物还遭受由真菌引起的疾病的侵害，影响植物的不同部分，甚至可能终止收获，在农业上造成巨大损失。

参考文献

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