所述琼脂MRS是用于分离和乳酸菌的枚举选择性固体培养基培养，尤其是乳杆菌属。这种琼脂是由Man，Rogosa和Sharpe于1960年创建的，名称相同，但由于其复杂性，经常使用MRS的缩写。
它由蛋白p，肉提取物，酵母提取物，葡萄糖，脱水山梨醇单油酸酯，磷酸氢二钾，乙酸钠，柠檬酸铵，硫酸镁，硫酸锰和琼脂组成。
Man Rogosa和Sharpe Agar（MRS）接种了乳酸杆菌。资料来源：作者为本文捐赠的照片：BáezE，GonzálezG，HernándezG，LópezE，MegaM。在调查过程中拍摄的照片标题：评估母乳和婴儿粪便中具有益生菌潜能的乳酸菌和双歧杆菌。
该组合物允许从临床样品，例如粪便，白带，口服样品和母乳以及乳制品和肉类食品中适当地发展乳酸菌。
由于乳酸菌很少参与疾病过程，因此在临床实验室中通常不使用它。但是，在食品微生物学领域，使用MRS琼脂的频率更高。
另一方面，某些研究中心使用这种培养基，其目的是研究乳酸菌。
基础
Man，Rogosa和Sharpe琼脂的成分相当复杂。通过分解其每个组件的功能，可以解释其基础。
蛋白质p，肉提取物，酵母提取物和葡萄糖是营养物质，可提供细菌生长所需的碳，氮，维生素和矿物质。此外，葡萄糖是大多数培养基中使用的通用能源。
另一方面，为了促进乳酸菌的生长，必须存在乳酸菌和相关细菌的代谢中必不可少的辅因子（阳离子）。这些化合物是钠盐，镁盐和锰盐。
同样，脱水山梨糖醇单油酸酯或聚山梨酸酯80是脂肪酸的重要来源，因为它们被吸收为营养物。
此外，脱水山梨醇单油酸酯和柠檬酸铵通过抑制伴随的菌群，特别是革兰氏阴性细菌的发育而起作用，从而提供了这种琼脂的选择性特征。
最后，琼脂是为培养基提供固体稠度的琼脂。
Man Rogosa Sharpe琼脂还有其他变体。其中之一补充了半胱氨酸（MRSc），对分离双歧杆菌和其他微生物非常有用。另一方面，MRS培养基补充了新霉素，巴龙霉素，萘啶酸和氯化锂，特别适用于乳制品中双歧杆菌的选择性计数。
制备
称出68.25克脱水培养基，并溶于一升蒸馏水中。静置5分钟。要完全溶解，请转至热源，经常搅拌，然后煮沸1至2分钟。在121℃的高压釜中灭菌15分钟。
离开高压釜时，静置几分钟，然后趁热在无菌培养皿中散发。
允许固化和翻转板，在板架中订购并冷藏直至使用。使用前，让板温至室温。
培养基的pH值应为6.4±0.2。一些商品房建议将pH值控制在5.5至5.9之间。
脱水培养基为米色，制备为深琥珀色。
脱水培养基和准备好的培养板均应保存在2-8°C下。
应用领域
MRS琼脂板可以表面播种（筋疲力尽或Drigalski铲）。也可以按深度播种。平板应在37°C的微需氧性（4％O 2和5-10％CO 2）中孵育24至72小时。
根据追求的目的（隔离或计数）选择播种方法。
殖民地的特征
推测的乳酸菌菌落颜色发白，在此琼脂上呈粘液状或乳脂状。随后必须确定它们。
乳酸菌的分离
为此，使用表面播种。要播种的样品需要事先进行操作。
对于母乳样品，建议以14,000 rpm的转速将1 ml样品离心10分钟，以去除脂肪层。丢弃900 µl，在剩余的100 µl中，将沉淀物悬浮并倒在MRS琼脂表面上，然后用Drigalski刮刀均匀地分配。
在粪便样品的情况下，称量一（1）克粪便，并在9 mL的0.1％无菌蛋白ept水中匀浆，稀释度为1/10。然后进行系列稀释，直到获得最终的10 -4稀释度。
最后，将100μl10 -2，10 -3和10 -4稀释液取并且每个稀释液琼脂上接种MRS，用抹刀Drigalski均匀地分配。
乳酸菌计数
在这种情况下，播种是按深度进行的。
对于母乳样品，取1 mL并置于无菌锥形塑料管中。在大约40°C的温度下添加MRS琼脂至25 mL的最终体积，以获得均匀的混合物。随后，将其以均匀的方式倒入无菌陪替氏培养皿中，并静置直至聚合。
对于粪便样品，如前所述进行稀释。取每种稀释液1 mL，并将其放入无菌锥形塑料管中。加入熔融的MRS琼脂至25 mL的体积。
将每种稀释液的混合物均匀倒入无菌培养皿中。最后，将其静置直至聚合。
Man Rogosa和Sharpe（MRS）琼脂的菌落计数。资料来源：为本文捐赠的照片。作者：BáezE，GonzálezG，HernándezG，LópezE，MegaM。研究期间拍摄的照片题为：评估母乳和婴儿粪便中具有益生菌潜能的乳酸菌和双歧杆菌。
研究水平
每天对乳酸菌的研究越来越引起人们的兴趣。研究人员尤其寻求了解新菌株及其作为乳制品生产标准化的入门发酵剂以及其他用途的潜力。
从这个意义上说，Alvarado等。（2007年）使用MRS琼脂进行了一项研究，他们分离，鉴定和鉴定了工匠安第斯熏制的委内瑞拉奶酪中存在的乳酸菌。
他们在奶酪中发现了乳球菌和乳杆菌属细菌的存在，并得出结论认为，分离菌株的混合物适合用作从巴氏消毒的牛奶生产奶酪的起始菌株。
另一方面，Sánchez等。（2017）使用MRS琼脂研究了仔猪消化道中乳酸菌的存在，以便将它们用作天然益生菌以提高健康仔猪的生产力。
他们使用这种培养基成功地分离出四个物种：约翰逊乳杆菌，短乳杆菌，平肠肠球菌和戊糖戊球菌。
同样，Báez等。（2019）使用MRS琼脂评估了母乳和婴儿粪便中具有益生菌潜力的乳酸菌（LAB）和双歧杆菌。
他们成功分离出母乳中的11个BAL和3个双歧杆菌，以及8个BAL和2个双歧杆菌。在粪便中。全部符合某些参数，证明它们是具有益生菌活性的细菌。
作者得出结论，纯母乳喂养婴儿的母乳和粪便都是益生菌的天然来源。
质量检查
要评估MRS琼脂的质量，请控制以下菌株：
发酵乳杆菌ATCC 9338，干酪乳杆菌ATCC 393，双歧双歧杆菌ATCC 11863，植物乳杆菌MKTA 8014，乳酸乳杆菌MKTA 19435，丹皮氏球菌MKTA 29358，大肠埃希氏菌和蜡状芽孢杆菌。
预期的结果是前6种细菌的生长令人满意，而大肠杆菌和蜡状芽孢杆菌必须被完全抑制。
参考文献
- Alvarado C，ChacónZ，Otoniel J，Guerrero B，LópezG.从委内瑞拉熏制的安第斯工匠奶酪中分离，鉴定和表征乳酸菌。用作入门文化。中心 （马拉开波）2007年；17（3）：301-308。可在以下网站找到：scielo.org。
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