在玉米粉琼脂是固体培养基,低营养功率,对于某些真菌的传代培养,并用于证明在白色念珠菌复杂的菌株的厚垣孢子是有用的。在英语中,它被称为玉米粉琼脂。
常规的玉米面培养基具有非常简单的组成,它包含玉米面,琼脂和水。由于其营养水平低,因此非常适合在中等时间内维持真菌菌株,尤其是黑真菌。
A.白色念珠菌复合物在玉米粉琼脂上的图形表示。B.在显微镜下看到的白色念珠菌复合体的衣原体孢子,形成于玉米面琼脂上。资料来源:A。GrahamColm /B。作者:CDC / Dr. 威廉·卡普兰(William Kaplan),礼貌:公共卫生图片库。
如果在琼脂制备过程中添加了1%的Tween 80,则白色念珠菌复合物的孢子形成在这种培养基中是有利的。衣原体孢子的形成是该物种的特征,并且实际上是唯一影响人类的物种。
还有其他形成衣原体孢子的物种,但它们不太可能影响人类,例如企鹅粪便中存在的澳大利亚假丝酵母或腐生菌很少出现的C. Clausnii。同样,异常物种C. stellatoidea和C. Tropicalis可以形成它们。
另一方面,向玉米粉培养基中添加葡萄糖有利于红毛癣菌菌株中色素的形成。
重要的是要强调指出,在玉米面琼脂中存在不形成菌丝或假菌丝的真菌,例如新隐球菌,不同于其他属。
玉米面琼脂可以在实验室中在家中制成,也可以使用商业媒体。
基础
玉米面是底物,琼脂是固化剂,水是溶剂。
玉米面琼脂可以补加补间80(脱水山梨糖醇单油酸酯或聚山梨酯聚酯80)。该化合物由于其乳化能力而降低了介质的表面张力。
它也创造了一个不利的环境,该环境抑制了细胞的过度繁殖并刺激了菌丝的生长,也有利于衣原体的产生。后者考虑了抵抗的结构。这种结构有助于鉴定白色念珠菌。
就其本身而言,这种培养基中的葡萄糖增加了某些真菌的色素形成能力。
应当指出,带有葡萄糖的玉米面培养基不能用于白色念珠菌复合物中的衣原体孢子的演示。
制备
自制玉米面琼脂制备
称出47克黄色玉米粉,并溶于500毫升蒸馏水中。加热至60℃,同时搅拌制备物约1小时。然后用一块纱布和一块棉花过滤,也可以将制备物通过2号Whatman滤纸再次过滤。
用蒸馏水补足至1000毫升。加入17克琼脂,加热至溶解。在121ºC高压灭菌15分钟。
服务于无菌培养皿中。存放在冰箱中。
所制备培养基的颜色为白色,外观为块状。
如果要在上述制剂中用葡萄糖制备玉米粉,请添加10 g葡萄糖。
商业玉米粉琼脂
称重17克脱水培养基,溶于1升蒸馏水。可以加热混合物,轻轻摇动使其完全溶解。在15磅,121℃的高压釜中灭菌15分钟。
倒入无菌培养皿中。让它凝固。倒置并保存在冰箱中直至使用。使用前先回火。
在25ºC下,pH值应为6.0±0.2。
吐温80玉米粉琼脂
为了符合ISO 18416,必须按照以下步骤制备玉米面琼脂:
每升重65克,并添加10毫升Tween80。加热并煮沸几分钟直至溶解,注意不要过热。在121℃灭菌15分钟。
玉米粉琼脂加葡萄糖
为了提高红毛癣菌菌落的显色能力并将其与薄荷茶菌区分开,可以在原始配方中添加0.2%的葡萄糖。您不需要Tween 80,因为葡萄糖会抑制衣原体的形成。
用
玉米粉琼脂的主要用途是用于念珠菌菌株的研究,通过对白色念珠菌物种中的衣原体孢子的特征观察来帮助鉴定。即,使用这种琼脂作为鉴定这些酵母的辅助方法。
腐生和致病菌均可在此琼脂上生长,但每种均形成特征性的菌丝结构。例如,Torulopsis属的种不产生菌丝体,而仅由芽孢杆菌属繁殖。
同样,天花粉虱和菊苣种在玉米粉琼脂上产生节肢动物,有时很难区分彼此。
Geotrichum属的节肢动物产生类似于冰球杆的菌丝延伸。
另外,使用补充有葡萄糖的玉米粉琼脂生产色素也可用于鉴定红毛癣菌。
播种
在玉米粉琼脂上继代培养在主要培养基-Sabouraud琼脂中-从临床样品,化妆品,土壤等中获得的可疑念珠菌菌落。播种该培养基,并在22℃下孵育24至48小时。如果需要,可以延长孵育时间。
衣原体示范
为此,必须使用Dalmau技术接种带有Tween 80的玉米粉琼脂。该方法包括用铂金手柄切取一部分可疑菌落,并在中间进行三个平行切割,使手柄保持45º。切口应彼此隔开1厘米的距离。
随后,将先前燃烧过的覆盖物放置在已播种的条纹上,以使一半被覆盖而另一半未被覆盖。
将接种的平板在30°C下孵育48-72 h,然后在显微镜下通过盖玻片进行检查。
维持真菌菌株
为了维持菌株,将接种和生长的板保存在冰箱(4至8℃)中。这样,它们可以持续数周,并用于教学或研究目的。
质量检查
为了进行无菌控制,将板在室温下不接种地温育,预计不会出现生长或颜色变化。
为了进行质量控制,可播种已知菌株,例如:金黄色葡萄球菌,ATCC 6538,大肠杆菌ATCC 25922,黑曲霉ATCC 16404,白色念珠菌ATCC 1023,酿酒酵母ATCC 9763。
预期结果是对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有部分抑制作用。在其余菌株中,期望令人满意的增长。
黑曲霉在大约5天的孵育时间内会长出黑色和有孢子的菌落。
白色念珠菌酵母菌具有衣原体生产。
酿酒酵母产生大的酵母细胞。
局限性
黄色沉淀物在板的底部形成,不应与菌落混淆。
参考文献
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