所述琼脂远藤或远藤介质是固体培养基,微分和具有一定程度的选择性培养。最初的配方是Endo在1904年创建的,旨在区分乳糖发酵菌和非发酵菌。最初,它是为分离伤寒沙门氏菌而设计的,但后来,该培养基的目的转向了寻找大肠菌。
远藤琼脂的原理仍然存在,但多年来其配方经历了无数变化。当前,培养基由动物组织的消化消化物,乳糖,磷酸氢二钾,亚硫酸钠,碱性品红和琼脂组成。
A:原始的远藤琼脂B:播种的远藤琼脂,在琼脂中间,您会注意到大肠杆菌菌株的金属光泽。资料来源:A:Strolch1983 / B:LenkaM
该培养基的主要用途与肠杆菌科和其他近亲属的革兰氏阴性杆菌的分离和分化有关。
长期以来,它一直用于检测水,乳制品和食品样品中的大肠菌,但如今,这种介质的使用已被具有类似功能的其他介质所取代。但是,一些微生物实验室使用这种琼脂从临床来源的样品中分离出肠杆菌科。
基础
内琼脂含有蛋白ept,这些蛋白as是不需要的微生物生长所必需的氨基酸,氮,碳和能量的来源。
另一方面,通过添加亚硫酸钠和碱性品红可以提供琼脂的选择性。两种成分均部分或全部抑制大多数革兰氏阳性细菌的生长。
通过存在可发酵的碳水化合物,在这种情况下是乳糖和碱性品红,也可作为pH指示剂来提供差异性。
在这种琼脂上生长并能够发酵乳糖的革兰氏阴性细菌将形成强力的粉红色菌落。是大肠杆菌的病原体,形成暗红色菌落,呈虹彩绿色金属光泽。这是由于碳水化合物发酵产生的酸量高。
应当注意,菌落周围的培养基也变成了强烈的粉红色。非乳糖发酵革兰氏阴性棒形成浅粉红色菌落,类似于中等或无色。
磷酸氢二钾平衡培养基的pH,琼脂是提供固体稠度的成分。
制备
远藤琼脂
称量41.5 g脱水培养基,并溶于1升蒸馏水中。频繁搅拌加热混合物,直到培养基完全溶解。在121℃,15磅压力的高压釜中灭菌15分钟。
从高压釜中取出时,冷却至约45-50°C的温度,摇匀混合物以使其均质,然后再食用。将20毫升倒入无菌培养皿中。
在冰箱中存放之前,让盘子固化,倒置并存放在空盘子中或用深色纸包裹。保护准备好的介质免于直射光非常重要。最佳做法是准备所需的确切数量。
如果存放在冰箱中,则应在使用前将板加热。
培养基的pH值应在7.2至7.6之间,所制备培养基的颜色为浅粉红色。
M-Endo琼脂变体
还有另一个版本的Endo琼脂(m-Endo),其遵循McCarthy,Delaney和Grasso的配方,其中包含更多的化合物,并且制剂形式也有所不同。
该变体包含:乳糖,类胰蛋白酶,酪蛋白的酶消化物,动物组织的酶消化物,氯化钠,磷酸氢二钾,亚硫酸钠,酵母提取物,磷酸二氢钾,碱性品红,脱氧胆酸钠,十二烷基硫酸盐钠和琼脂。
在这种情况下,称量51 g的脱水介质并将其悬浮在1升的20毫升乙醇蒸馏水中。
在搅拌的同时稍微加热直到培养基完全溶解。不应使其过热,也不应对其进行高压灭菌。混合物均匀后,在无菌培养皿中盛装并固化。
用
在某些国家,它仍用于计数食物和水样中的总大肠杆菌和粪便中的大肠菌群,特别是大肠杆菌是粪便污染的主要指标。
M-Endo Agar由美国公共卫生协会(APHA)建议用于监测和控制消毒和废水处理程序,以及评估饮用水的质量。
最广泛使用的方法是膜过滤,用十二烷基硫酸盐肉汤富集样品2至4小时。
通过最可能的数技术(MPN),它也可以替代EMB琼脂,用于食品和水的微生物学分析,特别是在完全确认阶段,以证实来自混浊EC肉汤的大肠杆菌的存在。
质量检查
播种已知或认证的对照菌株,以评估制备的Endo琼脂批次的质量。
可用于此目的的菌株包括:大肠埃希氏菌ATCC 25922,大肠埃希氏菌ATCC 11775,阴沟肠杆菌ATCC 13047,肺炎克雷伯菌ATCC 13883,鼠伤寒沙门氏菌ATCC 14028,弗氏志贺氏菌ATCC 12022,米氏变形杆菌ATCC 14700和肠杆菌15300 。
通过力竭将菌株接种并在需氧条件下于37°C孵育24小时。
预期结果是:
- 对于大肠埃希氏菌:强烈的红色菌落,具有金属光泽。
- 对于阴沟肠杆菌和肺炎克雷伯菌,菌落应为粉红色粘液状。
- 对于鼠伤寒沙门氏菌,弗氏链球菌和奇异疟原虫,菌落通常为浅粉红色或无色。
- 最后,粪肠球菌有望被部分抑制,因此其生长必须很弱,并带有非常小的,坚固的粉红色菌落。
局限性
-内源培养基的选择力低,因此,某些革兰氏阳性微生物,例如葡萄球菌,肠球菌甚至酵母菌都可以生长。
-其他不属于肠杆菌科的细菌也可以在这种培养基中发育,例如假单胞菌属和气单胞菌属。这些菌株的特征是无色不规则菌落。
-这种准备好的培养基对光非常敏感,因此,长时间暴露在光线下会使指示器系统恶化,从而不可逆地损坏培养基。
-介质的成分被认为具有致癌性,因此应避免直接接触。
-脱水介质具有极强的吸湿性,必须在室温下保存在其原始容器中,密闭并处于干燥环境中。
参考文献
- BD实验室。远藤琼脂。2013.可用:bd.com
- Neogen实验室。M Endo琼脂。可在以下网站获得:foodsafety.neogen.com
- 远藤琼脂。维基百科,免费百科全书。世界标准时间2017年9月7日,08:27。2019年二月28日,22:55。可在以下网址获取:en.wikipedia。
- MercK实验室。远藤琼脂。2019.可用:merckmillipore.com
- 技术表实验室。M –Endo琼脂LES。2015.可在以下网址获得:liofilchem.net