巧克力琼脂：基础，用途和制备方法 - 生物学 - 2025

在巧克力琼脂是固体培养基，富集的，非 - 选择性和非 - 微分。从营养的角度来看，它主要用于分离需要的微生物，尽管任何类型的细菌都可以在其中生长。

由于这个原因，它的有用性特别是在播种通常无菌的样本（例如CSF和关节液）时更加有用。虽然它也包括在播种微生物样品的选定方法中，但是在这些情况下，有必要添加抑制伴随菌群的抗生素。

带有细菌生长的巧克力琼脂

这种介质具有非常类似于巧克力的特征棕色，因此得名。制备与血琼脂非常相似，只是在这种情况下，必须加热血液以使红细胞分解。

它的制备物像血琼脂一样，非常易碎，因为它很容易被污染。因此，许多实验室更喜欢购买由商业公司已经准备好的保证其质量的介质。

基础

该培养基由营养丰富的琼脂基质和加热的血液组成。红细胞的溶血作用提供了X因子（血红素）和V因子（NAD），这是某些微生物（如嗜血杆菌属）生长所必需的。这对于分离奈瑟氏球菌也非常有用。

像血琼脂一样，可以根据需要将不同的培养基用作基础琼脂。尽管最推荐使用的是哥伦比亚琼脂，MüellerHinton，GC琼脂和Thayer Martin琼脂，但使用的培养基包括脑心脏灌注液和胰酶解大豆琼脂。

巧克力琼脂的一些变体包括称为Isovitalex或Polivitex的市售强化补品。

这些补充剂包含维生素B ₁₂，L-谷氨酰胺，腺嘌呤，盐酸鸟嘌呤，对氨基苯甲酸，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD），硫胺素焦磷酸盐，硝酸铁，硫胺素盐酸盐，半胱氨酸盐酸盐，L-胱氨酸和葡萄糖。

重要的是要注意，巧克力琼脂比血琼脂更富集，但不允许观察溶血模式。

应用领域

资料来源：pixnio.com。作者：

皮特·塞德尔（Pete Seidel），阿曼达·摩尔（Amanda Moore），蒙大拿州，托德·帕克（Todd Parker）博士，奥德拉·马什（Audra Marsh），美国疾病预防控制中心

用哥伦比亚琼脂制备的巧克力琼脂

该培养基包含酪蛋白和心脏的胰腺消化物，肉，氯化钠，琼脂，酵母提取物和玉米淀粉的消化性消化物。它还富含维生素，矿物质和必需氨基酸。

这种加热的血液基础非常适合分离奈瑟氏球菌属的细菌。另一方面，如果将布鲁氏菌的补充物另外添加到培养基中，则可以分离所述微生物。使用马血可以改善结果。

用GC基础琼脂制备的巧克力琼脂（用于淋球菌）

该培养基包含蛋白one，玉米淀粉，一元和二元缓冲液，氯化钠和琼脂。

大多数商业制备的巧克力琼脂样品都带有这种基质，并且不含加热的血液，而是由血红素和生长因子，维生素，矿物质，氨基酸，因子V和葡萄糖的化学补充剂合成的混合物。

MüellerHinton琼脂制成的巧克力琼脂

它用于使用5％加热的羊血测试耐寒微生物（如肺炎链球菌）的抗菌敏感性。

它也可用于初次分离奈瑟氏球菌和嗜血杆菌，但在分离嗜血杆菌的特殊情况下，最好使用马血，因为它是X和V因子的丰富来源。

另一方面，如果要播种的样品来自非无菌区域，建议添加抗生素以抑制该区域的正常菌群。

对于怀疑存在嗜血杆菌属细菌的呼吸道样本，使用杆菌肽抑制葡萄球菌，微球菌，链球菌和腐生性奈瑟氏菌的生长。

对于怀疑有Haemophilus ducreyi的生殖器下cre样，已成功使用如下制备的巧克力琼脂：Müeller-Hinton琼脂，含5％巧克力马血，1％Isovitalex浓缩物和3微克/毫升万古霉素。

用Thayer Martin琼脂准备的巧克力琼脂

该培养基是分离淋病奈瑟氏球菌的专用培养基。它必须包含抗生素以抑制伴随的菌群。用了羔羊的血。

制备

您应该看到准备使用的基础琼脂的指示。它们位于脱水培养基容器的背面。它们通常描述您准备一公升培养基必须称量多少。

所需的确切量可以在实验室中准备，它可以大于或小于一升。

计算方式

使用三分法则来计算准备所需体积所需的重量。例：

如果说1升需要重40克，而实验室需要800毫升，则说：

1000毫升----------- 40克

800毫升-----------– X

计算公式如下：

X = 32克（定量称量800毫升）。

称重并溶解

称量必要的量，并与水一起放入烧瓶中。

用中火加热，并轻轻旋转混合直至脱水介质完全溶解，使其沸腾1分钟。

消毒

将烧瓶置于高压釜中以在121℃下灭菌20分钟。

血液聚集

当离开高压釜时，使其静置直至培养基的温度大约在56至70°C之间以放置血液并混合直至培养基变成棕色。

如果您要添加补品，这是时候了。随后混合并向每个无菌培养皿中加入20 ml。

整个过程应在层流罩或本生灯的周围进行。

静置直至它们固化并倒置保存在冰箱中。

不使用血液制备巧克力琼脂的另一种方法

如上所述制备基础培养基，将商购获得的脱水血红蛋白溶解在高压釜中并灭菌。

将两种溶液均冷却至50℃，加入并添加补充剂。在无菌条件下混合，然后在无菌培养皿中食用。

质量检查

重要的是，将血液置于指定的温度下，因为它是裂解红细胞并同时保持对热敏感的因子V的理想选择。

琼脂表面不应留有气泡。对于每批100个板，应在37°C的烤箱中孵育一个或两个板24小时，以验证其无菌性。

为了获得最佳效果，准备后应立即使用巧克力琼脂。

对照细菌菌株应保存在实验室中，以评估新鲜培养基对具有临床重要性的主要营养微生物的生长的功效。

参考文献

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5. 维基百科的贡献者。巧克力琼脂。维基百科，免费百科全书。2018年12月17日，19：54 UTC。网址：en.wikipedia.org。