的西曲溴铵琼脂或西曲溴铵是设计用于铜绿假单胞菌的分离选择性固体培养基。它基于演示该物种的特色颜料的生产,并由King,Ward和Raney创建的Tech琼脂改性而成。
原始配方包含氯化镁,硫酸钾,明胶的胰消化和琼脂的盐。配方的修改包括添加鲸蜡胺(十六烷基三甲基溴化铵)和甘油。
接种铜绿假单胞菌的西曲美琼脂来源:BiotechMichael,来自Wikimedia Commons
在怀疑存在铜绿假单胞菌的情况下,西曲美琼脂可用于样品的微生物学研究。应当指出,这种细菌非常重要,因为尽管它是正常环境微生物群的一部分,但它经常表现为机会病原体。
因此,由这种细菌引起的最常见问题之一是医院感染,即那些在医院环境中发生的感染,攻击免疫力低下的患者。
另一方面,由于该微生物与湿度的亲和力,最易受污染的目标是:辅助呼吸设备,药品,喷雾器,水源,空调,消毒剂,肥皂溶液,注射液,开放性伤口,导管,导尿管等。
从这个意义上讲,西曲美琼脂可用于对上述元素进行微生物控制和培养。
基础
塞曲肽琼脂基于培养基促进铜绿假单胞菌生长,刺激其色素生成并进而抑制其他微生物生长的能力。
这些属性归功于其每个组件的功能。存在的明胶蛋白one可作为氮,维生素和矿物质的来源。甘油或甘油是碳源。
就其本身而言,西曲肽(十六烷基三甲基溴化铵)是抑制铜绿假单胞菌以外的细菌(包括其他属于同一属的细菌)生长的物质。
产生抑制作用的原因是cetramide充当阳离子去污剂,除铜绿假单胞菌和设法存活的其他细菌外,还设法使大多数细菌的质膜失稳。
另一方面,它包含氯化镁和硫酸钾。这些化合物刺激与铜绿假单胞菌产生各种色素的能力有关的表型表达,这些色素包括:绿脓素,pyoverdin,pyorrubin,pyomelanin和荧光素。最后,它包含琼脂-琼脂,使其具有坚实的一致性。
解释
对这种琼脂生长的解释如下:
观察到该细菌在所述样品中的推测结果是观察到具有规则边缘的圆形,光滑的菌落,产生蓝绿色,绿色,棕色或红色颜料,并散发出水果味(氨基苯乙酮)。
另一方面,当将板暴露于紫外线下时,在菌落上观察到明亮的黄绿色色素指示铜绿假单胞菌。
在紫外光下,在十六胺琼脂上的铜绿假单胞菌菌落的荧光。
应该注意的是,观察到的每种颜色是由于特定颜料的产生。蓝绿色颜料对应于生成的洋红蛋白,绿色对应于pyoverdin,红色对应于pyurrubin,棕色对应于pyomelanine,在紫外光下明亮的黄绿色荧光对应于荧光素。
制备
称出43 g脱水培养基并溶于蒸馏水。加入10毫升甘油。将混合物带到热源。煮沸几分钟直到完全溶解。
在121℃下高压灭菌15分钟。当温度约为50°C时,静置并在无菌培养皿中食用。
使其凝固,倒置,按顺序浇注并放置在冰箱中直至使用。在播种之前,应先从冰箱中取出西曲美琼脂平板,并使其恢复到室温。
培养基的最终pH应为7.2±0.2。
脱水介质的颜色是米色,制剂是不透明的白色。
应用领域
怀疑存在铜绿假单胞菌的所有样品都可以播种在西曲美肽琼脂上。因此,它可用于微生物学的所有领域(环境,工业,临床,水和食品)。
分析这种医院的环境并因此能够采取纠正措施非常重要,因为这种微生物通过患者使用的受污染的设备,药品,溶液和用品进入患者。
这样,微生物可以感染免疫抑制患者的下呼吸道,泌尿道和伤口。
铜绿假单胞菌的菌落计数也可以在微生物极限试验中进行。
播种
西曲美琼脂可以用作原代培养物。将板接种在其边缘之一上,并从那里通过排气将其分布到板的其余部分。液体样品可用drigalski刮刀表面接种。
将板在37℃下需氧培养24小时。
局限性
-一小部分铜绿假单胞菌菌株不产生绿脓素,因此可以解释为假阴性。
-在这种培养基中,某些具有临床重要性的假单胞菌种类受到抑制。
-尽管遵守了铜绿假单胞菌的描述特征,但必须通过其他鉴定测试加以证实。不应错过的一项测试是氧化酶测试,它必须呈阳性。
-某些肠杆菌科细菌可以在这种培养基中生长并形成黄色素,但与铜绿假单胞菌的不同之处在于,当平板置于紫外线下时,没有荧光。
-粘质沙雷氏菌设法开发并产生粉红色颜料。
-如果将接种有塞米特米琼脂的平板在室温下放置一段时间,铜绿假单胞菌菌株可能会丢失在紫外光下观察到的荧光,但是如果将它们在37°C下再次孵育,其特性将会恢复。
质量检查
为了分析西曲肽琼脂的良好性能,可以使用对照菌株,例如:铜绿假单胞菌ATCC 9027,嗜麦芽嗜单胞菌ATCC 13637,大肠杆菌ATCC 25922和金黄色葡萄球菌ATCC 25923。
预期结果是:
- 铜绿假单胞菌生长良好,具有蓝绿色色素和正荧光素。
- 嗜麦芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌将被部分或完全抑制。
- 预计大肠杆菌将被完全抑制。
参考文献
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