所述胆汁七叶苷琼脂是一种选择性和鉴别培养基固体培养。它被用作诊断测试,以确定某种微生物在含有胆汁的培养基中生长的能力,并将糖苷七叶皂甙分解为七叶皂甙和葡萄糖。
此诊断测试用于区分属于D组的链球菌属(胆汁七叶菌素阳性)和对该测试反应为阴性的其他链球菌。
胆汁七叶树琼脂平板,接种肠球菌菌株(测试阳性)。资料来源:未提供机器可读的作者。假定为Philippinjl(基于版权主张)。
应该注意的是,viridans组的某些链球菌可以水解七叶红素,但在胆汁中浓度为40%时不能生长,因此,在该介质中该组的反应是阴性的。
另一方面,胆红素培养基也可用于单核细胞增生李斯特氏菌或气球菌属物种的诊断,因为这些微生物是胆红素阳性的。
Esculin胆汁琼脂由蛋白ept,肉提取物,牛胆,七叶树素,柠檬酸铁,琼脂和蒸馏水组成。一些商品房在介质的组成中包括叠氮化钠。
如果您单独使用所有化合物,则可以在实验室中制备培养基,也可以从商业脱水培养基中制备。
基础
胆红素培养基含有蛋白one和肉提取物,这两种化合物都为微生物的生长提供了必要的营养。
它还包含七叶内酯;该化合物是通过简单的单糖(葡萄糖)与通过缩醛键或糖苷键连接的称为6,7-二羟基香豆素或七叶皂苷(葡糖苷)的化合物的结合而形成的葡糖苷。
该测试基于显示细菌是否能够水解七叶树素。如果发生这种情况,则七叶树素分解为七叶树素和葡萄糖。Esculetina与培养基中存在的铁反应,形成深棕色几乎为黑色的化合物。
这意味着柠檬酸铁充当反应显影剂。该特性使胆汁Esculin琼脂成为差异培养基。
就其本身而言,胆汁是阻止某些微生物生长的抑制剂,因此,细菌在分裂七叶皂苷之前必须能够在胆汁存在下生长。因此,该介质被认为是选择性的。
在这种环境中可能繁殖的细菌主要是生活在肠道环境中的细菌。
从这个意义上讲,一些商业公司将叠氮化钠添加到培养基中以进一步抑制肠杆菌革兰氏阴性杆菌的生长,从而增加了培养基对链球菌生长的选择性。
最后,琼脂赋予培养基以固体稠度,水是化合物的溶剂。
制备
自制胆汁琼脂琼脂
衡量:
5克蛋白ept
3克肉提取物
40克牛胆
1克七叶皂甙
0.5克柠檬酸铁
15克琼脂
1000毫升蒸馏水
在添加叠氮化钠的情况下,称量0.25g /升并添加到混合物中。
将成分溶解在升的蒸馏水中,加热直至化合物完全溶解。将5 ml分配到16 x 125 mm螺帽试管中。在121℃,15磅压力下高压灭菌15分钟。
从高压釜中取出,将试管倾斜在支架上,使琼脂在宽的长笛喙中凝固。
存放在冰箱中直至使用。播种前使其达到室温。
也可以准备胆汁七叶菜琼脂平板;在这种情况下,将整个混合物在烧瓶中高压灭菌,然后分配到无菌培养皿中。让它们固化并存储在冰箱中。
培养基的pH值必须为6.6±0.2。
从商业培养基中制备胆汁七宝琼脂
称量插入物指定的量。从一家商号到另一家商号,这可能有所不同。随后,与上述步骤相同。
培养基的pH值应为6.6±0.2。脱水培养基的颜色为浅米色,制备的培养基为深琥珀色。
商业胆红素培养基。资料来源:作者MSc摄。Marielsa Gil。
应用领域
胆红素培养基主要用于区分D组链球菌(胆红素阳性)与其余链球菌组(胆红素阴性)。
结合盐腌过的肉汤生长试验和胆汁七叶树素试验,可以鉴定出一组特殊的D组链球菌,称为肠球菌。
这种特殊的链球菌属属于上述属的D组,它们能够在胆汁存在下水解七叶红素,D组的其余成员也一样,但是它们也能够在高盐分培养基(BHI中加入氯化物钠的含量为6.5%)。
因此,水解七叶树胆汁但在高盐汤中不生长的链球菌称为非肠球菌D组链球菌。
播种
最好从纯的Todd-Hewitt 24小时肉汤中接种培养基。
用巴斯德吸管将2滴加到培养基表面,并用铂环在培养基中铺开。
在达到孵育时间的同时,在35°C下孵育48小时,可以对其进行监控以查看是否存在阳性反应。如果在该时间结束时反应仍为阴性,则可以将其孵育长达72小时。
解释
阳性反应:长笛喙出现暗褐色,几乎是黑色(在试管测试的情况下)或菌落周围琼脂变黑(在平板测试的情况下)。
阴性反应:温育72小时后,在不到一半的试管中,不会发生培养基变黑或出现黑色外观。另一方面,细菌在培养基中生长而没有出现黑色的情况应视为阴性测试。
质量检查
为了评估培养基的质量,必须提供粪肠球菌ATCC 29212菌株作为阳性对照,不属于D组的链球菌菌株作为阴性对照。
局限性
-不含叠氮化钠的培养基可使肠胃革兰氏阴性杆菌生长。其中一些可以使中间变黑。
-一些商品房添加低浓度的胆汁(10%),因此一些不属于D组的链球菌会在培养基中生长并水解七叶树素,这可能会导致解释错误。
参考文献
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- Neogen实验室。胆汁七叶菜琼脂。可在以下网站获得:foodsafety.neogen.com