所述琼脂Baird的帕克是固体介质的选择性和差动培养。它创建于1962年,用于检测和计数凝固酶阳性葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。
它由酪蛋白的胰腺水解产物,肉提取物,酵母提取物,氯化锂,甘氨酸,丙酮酸钠,亚碲酸钾,琼脂和蛋黄乳液组成。
Baird Parker琼脂上的典型金黄色葡萄球菌菌落。资料来源:Daizy John
Baird Parker琼脂基于金黄色葡萄球菌减少亚碲酸盐并产生卵磷脂酶的能力。两种特性均产生具有该物种特定特征的菌落。因此,在检测该微生物方面非常有效。
金黄色葡萄球菌的典型菌落是黑色或深灰色,具有无色的边界和围绕它们的浅光晕,使它们与其他微生物区分开来。这种病原体可以在临床样品,水,化妆品以及生或熟食品中找到。
由于其产生的多种病理,例如食物中毒,烫伤的皮肤综合症,中毒性休克综合症,脓肿,脑膜炎,败血病,心内膜炎等,其诊断或检测极为重要。
基础
滋养力量
酪蛋白,肉提取物和酵母提取物的胰腺水解产物是一般微生物发育所必需的营养素,维生素和矿物质的来源,而丙酮酸和甘氨酸是有利于金黄色葡萄球菌特定生长的化合物。
可选择的
Baird Parker琼脂具有选择性,因为它含有抑制伴随菌群生长并促进金黄色葡萄球菌生长的物质。抑制性化合物是氯化锂和碲化钾。
微分
这种培养基可以将金黄色葡萄球菌与其余的凝固酶阴性葡萄球菌区分开来。金黄色葡萄球菌具有将亚碲酸盐还原为游离金属黑色碲的能力,形成黑色或深灰色菌落。
同样,蛋黄提供底物以证明卵磷脂酶和脂肪酶的存在。金黄色葡萄球菌是卵磷脂酶阳性的,因此在菌落周围会观察到清晰的光环,表明卵磷脂已被水解。
从这个意义上讲,这种琼脂上出现有光泽的黑色或深灰色菌落,周围带有浅色的光晕,表明存在金黄色葡萄球菌。
如果形成沉淀区,则表明脂肪酶活性。一些金黄色葡萄球菌菌株是脂肪酶阳性,而其他则是阴性。
在金黄色葡萄球菌为脂肪酶阳性的情况下,将在黑色或深灰色菌落周围观察到不透明区域,然后由于卵磷脂酶的作用而出现浅色晕。
除能在该培养基上生长的金黄色葡萄球菌以外的细菌菌落将发展为无色或棕色菌落,周围无光环。
还可以看到带有或不带有无色边框但没有光晕的非典型黑色菌落。不应考虑这些菌落,因为它们不对应于金黄色葡萄球菌。
制备
蛋黄乳液
取一个新鲜的鸡蛋,洗净并放在70%酒精中2至3个小时。然后将鸡蛋无菌打开,并将白色蛋黄小心地分离。之后,取50ml蛋黄,并与50ml无菌生理溶液混合。
碲化钾1%w / v
一些商品房出售可使用的1%碲化钾。在介质凝固之前将其添加到介质中。
为了在实验室中制备该溶液,称取1.0克亚碲酸钾并将其溶解在一份水中。随后,完成加水量直至达到100毫升。该溶液必须通过过滤方法进行灭菌。
培养基的制备
称出60克脱水培养基,并溶于940毫升蒸馏水。让混合物静置约5-10分钟。
经常搅拌介质以加热,以改善溶解过程。煮沸一分钟。在121°C的高压釜中灭菌15分钟。
静置直至温度达到45°C,然后加入50 ml的蛋黄乳液和10 ml的1%亚碲酸盐。充分混合,然后将15-20毫升倒入无菌培养皿中。
使其固化,倒置斑块,然后存放在冰箱中直至使用。
所制备培养基的最终pH必须为6.8±0.2。
在播种样品之前,等待板达到室温。通过划线或用Drigalski刮刀在表面上播种,将板播种。
脱水介质的颜色为浅棕褐色,制得的介质的颜色为浅琥珀色。
用
临床样本
将临床样品直接播种,在板的一端排出部分材料,然后从那里用尽的条纹将其划线。在35-37°C下孵育24至48小时。
食物样本
称量10克食物样品,并在90毫升0.1%蛋白ept水中匀浆,如有必要,可从中制备稀释液。用0.3 ml准备好的溶液一式三份接种板,并用Drigalski刮刀将其接种在表面上。在35-37°C下孵育24至48小时。
这种方法可以对获得的典型菌落进行计数,当怀疑金黄色葡萄球菌的存在每克/毫升样品高于10 CFU时,它是理想的选择。
如果怀疑金黄色葡萄球菌的数量很少或有大量伴生菌群,建议用10%NaCl和1%丙酮酸钠在胰酶解大豆肉汤中富集样品。这将促进金黄色葡萄球菌的生长并抑制伴随菌群的发育。将浑浊的试管接种在Baird Parker琼脂上。
水样
在灭菌的真空过滤系统中,将100毫升研究用水过滤,然后用无菌镊子除去0.4微米的微孔膜,并将其放在Baird Parker板上。在35-37°C下孵育24至48小时。该技术允许对典型的金黄色葡萄球菌菌落进行计数。
质量检查
已知菌株如金黄色葡萄球菌ATCC 25923,金黄色葡萄球菌ATCC 6538,表皮葡萄球菌ATCC 12228,大肠杆菌ATCC 25922或奇异变形杆菌ATCC 43071可用于评估Baird Parker琼脂的质量。
对于金黄色葡萄球菌ATCC菌株,已知减少亚碲酸盐,并且它们是脂肪酶和卵磷脂酶阳性。因此,必须有令人满意的发育并生长具有黑色中心和无色边界,不透明的光环和最外层的光环的凸菌落。
就其本身而言,预期表皮葡萄球菌在该培养基上发育不良,具有棕灰色至黑色菌落,没有光晕。
对于大肠杆菌和奇异假单胞菌,预期将被完全或部分抑制。在生长的情况下,将形成棕色菌落而没有不透明区域或浅色光环。
建议
-加入亚碲酸盐和蛋黄后,不应加热培养基。
-蛋黄乳剂的制备及其在中间的添加是非常容易受到污染的步骤。必须格外小心。
-如果存在典型的金黄色葡萄球菌菌落,则应通过在所述菌株上进行凝固酶测试来确认。
-如果对凝固酶的结果有疑问,则应进行其他确认性测试。
-注意不要将典型的金黄色葡萄球菌菌落与非典型黑色菌落混为一谈。
参考文献
- 维基百科的贡献者。Baird-Parker琼脂。维基百科,免费百科全书。2017年3月15日,19:36 UTC。可用网址:wikipedia.org/ 2019年2月18日访问。
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