的DAPI（4”，6-二脒基-2-苯基吲哚）是由荧光性的染料作为一个标记，广泛用于现有技术的荧光显微镜或流式细胞仪，等等。它发出的荧光是明亮的蓝色，其激发发生在455-461 nm之间（紫外线）。
DAPI染料可以很容易地穿过死细胞的细胞膜。它也可以染色活细胞的核，但在这种情况下，其浓度必须更高。
荧光染料DAPI的化学结构。来源：图像：文件：DAPI.svg是此文件的矢量版本。当它不逊色时应使用它代替此光栅图像/ Richard Wheeler（Zephyris）编辑图像
该染料能够访问其具有特殊亲和力的细胞DNA，并以很高的亲和力与氮基腺嘌呤和胸腺嘧啶结合。因此，它在某些分子生物学技术中非常有用。
该化合物属于吲哚染料类，并且已证明比溴化乙锭和碘化丙锭对DNA的敏感性更高，尤其是在琼脂糖凝胶上。
这种荧光染料的用途非常广泛，因为它可用于：研究凋亡过程中DNA的变化（细胞死亡），从而检测该过程中的细胞；用于DNA足迹照片（DNA照片打印）；研究细菌污染；或可视化核分割。
它还已用于研究染色体条带，检测支原体sp DNA，DNA-蛋白质相互作用，通过免疫荧光染色和计数细胞，甚至使成熟的花粉粒着色。
特点
DAPI是其化学名称的缩写（4'，6-diamidino-2-phenylindole）。其分子式为C 16 H 15 N 5。分子量为350.3。在紫外光范围（345至358 nm）附近，发生DAPI-DNA复合物的最大激发，而最大荧光发射发生在455-461 nm之间。
这种染料的特征是黄色粉末，但是带有这种荧光团的结构发出明亮的蓝光。
它是可溶于水的化合物，但是，为了加速其溶解，可以施加一些热量。可以用PBS稀释，但不能直接溶解在其中。
染料制备后，必须在2至8°C（冰箱）的温度下避光保存，即避光保存。在这些条件下，该染料稳定超过3周或几个月。
如果将其避光放置在室温下，其稳定性会下降2到3周，但直接暴露在光下，其劣化会非常快。如果您想存放更长的时间，可以将其冷藏在-20°C下等分。
基础
这种染色是基于在主要分子生物学技术中产生核复染的，例如：流式细胞仪，荧光显微镜和中期染色体或中间核的染色。
该技术基于染料与小沟的遗传物质（DNA）中所含的氮基（腺嘌呤和胸腺嘧啶）具有很高的亲和力。在细胞质水平上，它只留下很少的背景。
当荧光染料结合到DNA的腺嘌呤和胸腺嘧啶区域时，荧光显着增加（增加20倍）。它发出的颜色是亮蓝色。值得注意的是，当与GC（鸟嘌呤-胞嘧啶）碱基对结合时，没有荧光发射。
重要的是要注意，尽管它也具有与RNA的亲和力，但这不会引起问题，因为与DNA相比，该分子发出的最高能量是在另一个波长（500 nm）处发生的，而不是DNA。纳米 此外，一旦与RNA结合，荧光的增加仅为20％。
DAPI比活细胞更能染色死细胞（固定的），因为需要更高浓度的染料来染色活细胞，这是因为当细胞存活时，细胞膜对DAPI的渗透性要差得多。
DAPI染料可与红色和绿色荧光团结合使用，以获得多色体验。
用
DAPI（4'，6-diamidino-2-phenylindole）是一种出色的荧光团，因此被广泛用于各种技术和各种目的。下面说明主要技术中DAPI的使用。
流式细胞仪
研究人员Gohde，Schumann和Zante于1978年率先使用并提出DAPI作为流式细胞术技术的荧光团，由于其对DNA的高敏感性和高荧光发射强度而获得了巨大的成功。
在该技术中使用DAPI可以研究细胞周期，细胞定量以及活细胞和死细胞的染色。
尽管还有其他着色剂，例如溴化乙锭，赫斯特氧化物，a啶橙和碘化丙啶，但DAPI是最广泛使用的一种，因为它比前面提到的那些更耐光。
对于这种技术，需要固定细胞，为此，可以使用无水乙醇或4％多聚甲醛。离心样品并弃去上清液，随后通过加入5ml PBS缓冲液15分钟使细胞水化。
随着时间的流逝，用浓度为3 µM的染色缓冲液（BioLegend的FOXP3）制备DAPI染色剂。
离心样品，弃去上清液，然后在室温下用1 ml DAPI溶液覆盖15分钟。
用适当的激光将样品带到流式细胞仪。
流动微荧光法
使用DAPI的另一种技术是与另一种荧光团称为光神霉素的流动微荧光法。两者都可用于单独定量叶绿体DNA，但DAPI最适合测量T4噬菌体颗粒。
杂种
这项技术基本上使用标记为DAPI的荧光染料的DNA探针。
样品需要热处理以使双链DNA变性并将其转换为两条单链。随后将其与具有目标序列的DAPI标记的变性DNA探针杂交。
后来将其洗涤以消除未杂交的物质，使用对比剂可视化DNA。荧光显微镜可以观察杂交探针。
该技术的目的是检测染色体DNA中的特定序列，从而能够诊断某些疾病。
这些细胞分子技术对确定染色体核型研究的细节很有帮助。例如，他显示了腺苷和胸腺嘧啶的富含碱基对的区域，称为异色区域或DAPI带。
该技术被广泛用于研究动植物的染色体和染色质，以及诊断人类的产前和血液病理学。
在此技术中，建议的DAPI浓度为150 ng / ml，持续15分钟。
组装好的幻灯片应在2-8°C的光线下保存。
免疫荧光染色
细胞用4％多聚甲醛固定。如果要使用其他染色剂，则将DAPI作为复染剂留在最后，并用PBS溶液覆盖细胞15分钟。随着时间的流逝，通过用PBS稀释制备DAPI溶液，以使最终浓度为300 µM。
然后除去过量的PBS，并用DAPI覆盖5分钟。洗几次。在适当的滤光片下，在荧光显微镜下观察载玻片。
安全表
该化合物必须小心处理，因为它是具有诱变特性的化合物。活性炭用于从要丢弃的水溶液中消除该化合物。
必须使用手套，工作服和安全眼镜，以免发生此试剂事故。如果发生皮肤或粘膜接触，应使用足够的水冲洗该区域。
切勿用嘴吸移该试剂，而应使用移液器。
请勿用微生物试剂污染试剂，因为这会导致错误的结果。
不要稀释DAPI染色剂超过建议的浓度，因为这会大大降低染色剂的质量。
不要将试剂暴露在直射光下或保持温暖，因为这会减少荧光。
参考文献
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