的巯基乙酸盐培养液是一个介质富集流体稠度。它的首字母缩写为FTM,因为它的缩写为English Fluid Thioglycollate Medium。它是由布鲁尔(Brewer)创建的,并于1944年由维拉(Vera)修改后添加了酪蛋白p。
这种培养基的氧化还原电位低,因此不建议用于开发严格的需氧细菌,但它是回收兼性需氧,严格厌氧和不需菌的微需氧细菌的理想选择。
硫代乙醇酸盐肉汤,无指示剂。显示白带。资料来源:Bobjgalindo
这种培养基在分离和回收各种微生物中观察到的高性能,已使其被美国药典(USP),农业化学家协会(AOAC)和欧洲药典( EP)。
这些组织将其推荐用于药品的无菌控制测试以及各种样品的富集。
巯基乙醇酸乙二醇酯由少量酵母提取物,酪蛋白,无水右旋糖,L-胱氨酸,氯化钠,巯基乙酸钠,刃天青和琼脂组成。
该培养基有几种版本,其中包括:带指示剂的巯基乙酸盐肉汤,无指示剂的巯基乙酸盐肉汤,具有指示剂的富含巯基血红素和维生素K 1的巯基乙酸盐肉汤,以及含有碳酸钙的巯基乙酸盐肉汤。
值得注意的是,富含血红素和维生素K的巯基乙酸盐肉汤变体可增强厌氧厌氧菌的生长,而含有碳酸钙的巯基乙酸盐肉汤可用于抵消微生物生长过程中产生的酸。
基础
巯基乙酸盐肉汤被认为是非选择性富集培养基,因为它可以使大多数非难消化细菌生长。营养需求由酵母提取物,胰腺消化物和葡萄糖提供。
另一方面,这种培养基尽管是肉汤,但含有少量的琼脂。这意味着它具有较低的氧化还原电势,这是因为它减慢了氧气的进入,从而使氧气随着其深入管内而减少。
这就是为什么该培养基非常适合兼性需氧,微需氧和严格厌氧细菌的发展的原因,后者2无需在这些条件下孵育。相同的介质可调节介质中的氧气量,该氧气在管的底部不存在,而在表面上则足够。
同样,巯基乙酸盐和L-胱氨酸起还原剂的作用,有助于防止有害细菌积累的物质(例如过氧化物)的积累。此外,这些化合物还包含巯基(-SH-),可中和汞衍生物,砷和其他重金属的抑制作用。
就刃天青而言,它是氧化物还原的指标。该物质在还原时是无色的,在氧化时是粉红色的。有指示性和非指示性巯基乙酸盐肉汤变体。它的使用将取决于样品的类型和实验室的偏好。
同时,氯化钠保持了巯基乙酸盐肉汤的渗透平衡,使用无水形式的葡萄糖可防止脱水介质中的水分过多。
制备
带指示剂的巯基乙酸盐肉汤
称出29.75 g脱水培养基,并溶于1升蒸馏水中。将混合物静置约5分钟。移至热源并经常搅拌直至完全溶解。
将培养基倒入试管中,并在121°C下高压灭菌15分钟。使用前先冷却。检查商品房的插入物是否得到保护。有些建议在室温下避光保存,而另一些则建议在避光的冰箱中保存。
制备的培养基的pH为7.1±0.2。
脱水介质的颜色为浅米色,制得的介质为浅琥珀色,具有一些乳白色。
硫醇乙醇酸盐肉汤,含有富含血红素和维生素K的指示剂
有一些商业培养基已经含有血红素和维生素K 1,特别是用于厌氧菌的培养。
如果您没有厌氧菌的富集培养基,则可以制备基本的巯基乙酸盐肉汤。为此,每升培养基添加 10毫克的氯化血红素和1毫克的维生素K 1。但是,如果将血液或血清添加到巯基乙酸盐肉汤中,则不需要添加血红素或维生素K。
巯基乙酸盐与碳酸钙的汤
它可以从市场上买到,并按照插页上的说明进行制备。
硫代乙醇酸肉汤,无指示剂
它具有与碱性巯基乙酸盐相同的组成,但不含刃天青。
称重30克脱水培养基,并溶于一升蒸馏水中。其余制剂与巯基乙酸盐含指示剂的肉汤中所述的相同。
用
巯基乙酸盐肉汤可用于丰富临床样品,特别是来自无菌部位的样品。它也可用于非临床样品,例如化妆品,药物等。
为了接种液体样品(例如CSF,滑液等),首先将样品离心,然后取2滴沉淀物并放入巯基乙酸盐肉汤中。在35°C下孵育24小时。如果此时没有生长(浑浊),则将其孵育最多7天。
如果用拭子取样,首先将培养基接种在平板中,最后将拭子引入肉汤中,将突出部分分开,将管盖好,将拭子留在内部。在35°C下孵育24小时,最多7天。
对于固体样品,在生理盐水溶液(SSF)中匀浆,然后用2滴悬浮液接种巯基乙酸盐肉汤。
有时可将其用作怀疑有严格厌氧菌的样品的运输介质,或用作备用浓缩肉汤。
具有碳酸钙的巯基乙酸盐发酵液变体可用于较长时间维持对照菌株,因为它具有中和使用葡萄糖产生的酸的能力。这些酸对某些细菌有毒。
通过培养基的浊度可以观察到巯基乙酸盐肉汤的生长。建议根据样本类型和可疑微生物进行革兰氏染色,然后在非选择性和选择性培养基中进行继代培养。
质量检查
为了控制无菌,建议在不接种的情况下孵育一或两个肉汤。预期的结果是清澈的肉汤,没有颜色变化,尽管通常在试管表面看到淡粉红色。
为了进行质量控制,应接种10-100 CFU的认证对照菌株,例如金黄色葡萄球菌ATCC 6538,黄球微球菌ATCC 9341,枯草芽孢杆菌ATCC 6633,铜绿假单胞菌ATCC 9027,产孢梭状芽孢杆菌ATCC 19404,梭状芽孢杆菌11437拟杆菌(Bacteroides vulgatus)ATCC 8482。
由于这些微生物在快速生长,因此在30-35°C的需氧菌中孵育24小时(最多3天)。
在所有情况下都有望获得良好的发展,除了黄微球菌和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),它们可能会适度发展。
为了控制富含血红素和维生素K 1的硫代乙醇酸肉汤的质量,可以使用控制菌株寻常杆菌(Bacteroides vulgatus)ATCC 8482,产气荚膜梭状芽孢杆菌(Clostridium perfringens)ATCC 13124和脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)ATCC 25285。
建议
-有时可以观察到带有指示剂的巯基乙酸盐肉汤表面变成粉红色;这是由于介质的氧化。如果粉红色覆盖了全部肉汤的30%或更多,则可以在水浴中将其加热5分钟,然后再次冷却并使用。
这将除去吸收的氧气,使介质恢复其原始颜色。此过程只能执行一次。
-为了改善需氧菌的生长,请在盖子稍微松动的情况下进行孵育。但是,为此目的,最好使用脑部心脏浸液肉汤或胰蛋白酶酶大豆肉汤,以使严格的需氧菌适当发育。
-应避免介质冻结或过热,因为两种情况都会损坏介质。
-直射光会损坏培养基,必须避光保存。
参考文献
- 大不列颠实验室。硫代乙醇酸酯USP和指示剂。2015.可在以下网址找到:labBritania.com。
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- 在试管中准备用于培养厌氧微生物的BBL培养基。巯基乙酸盐介质。2013.可用:bd.com
- 福布斯(Forbes B),萨姆(Sahm D),韦斯菲尔德(Weissfeld)A.(2009)。 Bailey&Scott微生物学诊断。 12版。社论Panamericana SA阿根廷。