的丙二酸酯肉汤是用于诊断测试(丙二酸盐)的液体培养基中,用于区分肠杆菌科的一些属。它由莱夫森(Leifson)在1933年创建,后来由尤因(Ewing)修改,后者在原始配方中添加了少量的葡萄糖和酵母提取物。
该培养基目前由酵母提取物,硫酸铵,磷酸氢二钾,磷酸一钾,氯化钠,丙二酸钠,右旋糖和溴百里酚蓝组成。该测试通常包含在肠杆菌科的生化识别电池中,有助于区分某些属和种。
丙二酸测试的图形表示。A.阴性测试,B。(酸化)阴性测试,C。(中等碱化)阳性测试。资料来源:彩色管publicdomainpictures.net
丙二酸测试主要基于某些微生物利用丙二酸钠作为唯一碳源和使用硫酸铵作为氮源的能力。
在肠杆菌属,克雷伯菌属和柠檬酸杆菌属的某些物种中,丙二酸测试通常是阳性的。而埃希氏菌,沙门氏菌,志贺氏菌,爱德华氏菌,耶尔森氏菌,沙雷氏菌,摩根氏菌,变形杆菌和普罗维登西亚菌的大多数物种都会产生负面反应。
基础
丙二酸测试包括显示那些能够将丙二酸钠用作唯一碳源并将硫酸铵用作氮源的细菌。
大多数不使用丙二酸的肠杆菌科细菌都能够在这种培养基中生长,以葡萄糖和酵母提取物为营养。
在这种情况下,通过使用蛋白alkali碱化的任何尝试都将被葡萄糖发酵产生的酸的产生所抵消。同样,磷酸氢二钾和磷酸一氢钾充当缓冲剂,将pH值保持在6.7。
这就是为什么当测试结果为阴性时,肉汤保持原始颜色(绿色)的原因。在极少数情况下,培养基会由于葡萄糖的发酵而变成酸性;如果不使用蛋白ept和pH指示剂,则会使培养基的颜色变成黄色。为此,pH必须降至6。
然而,当该测试为阳性时,据说该微生物分别使用丙二酸酯和硫酸铵作为碳和氮源,而没有利用其他成分。
在这种情况下,由于钠的释放和随之形成的NaOH,介质变成碱性。从这个意义上讲,当pH等于或大于7.6时,pH指示剂(溴百里酚蓝)会将介质的颜色从绿色变为蓝色。蓝色可以是浅色或浓红色(普鲁士蓝)。
最后,氯化钠保持了介质的渗透压,水是所有组分的稀释剂。
解释
相同颜色的肉汤(绿色)-阴性测试
黄肉汤:阴性试验
浅或深蓝色肉汤:测试阳性
有一种变体,称为苯丙氨酸丙二酸肉汤,也称为Shaw and Clarke培养基。在这种情况下,可以分析两个测试:使用丙二酸酯作为碳源和由苯丙氨酸生产丙酮酸。
制备
丙二酸肉汤
称重所选择的商业公司的插页中指定的克数(可能会有所不同)。称量的克悬浮在一升蒸馏水中。稍微加热直至完全溶解。将3 ml培养基分配到带棉帽的13/100试管中。
在121°C的高压釜中灭菌15至20分钟。
使用前先冷却。如果不打算立即使用它们,请将其存放在冰箱中直至使用。接种前将肉汤调至室温。
培养基的pH值应为6.7±0.2。所制备培养基的颜色为深绿色。
苯丙氨酸丙二酸肉汤
称量11克脱水培养基,并溶于1升蒸馏水中。其余的准备工作与前面描述的相同。
也可以通过在杀菌前向丙二酸肉汤培养基中添加2 g / L苯丙氨酸来制备。
用
它被用作生化测试电池组的一部分,这些电池被组装用于鉴定肠杆菌科的细菌。
有助于区分:
-埃希氏菌属和沙雷氏菌属(-)的克雷伯菌属和肠杆菌属(+)。
-肠沙门氏菌(Salmonella enterica ssp enterica)(-)种中的肠沙门氏菌(Salmonella enterica ssp arizonae),肠炎沙门氏菌(Salmonella enterica ssp salame)和沙门氏菌(Salmonella enterica ssp diarizonae)(+)。
-通常来自克雷伯菌属(+),来自放线杆菌属(-)。
-有时,它可以帮助区分不属于肠杆菌科的细菌的属和细菌,例如非发酵革兰氏阴性杆菌粪便产碱杆菌(+)和不动杆菌属(-)。
资料来源:Koneman E,Allen S,Janda W,Schreckenberger P,Winn W.(2004年)。微生物学诊断。第五版。社论Panamericana SA阿根廷。
处理
在打火机下,使用经过适当消毒和冷却的铂金提手取一部分纯古龙水。将采集的样品(轻度接种物)溶解在丙二酸肉汤中。在需氧条件下于35°C±0.2的条件下将盖松弛培养24至48小时。
丙二酸肉汤也可以在胰蛋白酶大豆肉汤中培养18-24小时。在这种情况下,用无菌移液管取0.01 ml,然后接种丙二酸肉汤。在需氧条件下于35°C±0.2的条件下将盖松弛培养24至48小时。
最后,将解释结果。孵育48小时后,任何蓝色痕迹均应视为阳性。在经过48小时的孵育时间之前,不得将测试解释为阴性。
在使用苯丙氨酸丙二酸酯肉汤变体的情况下,首先解释丙二酸酯,然后加入5滴1N HCl和3-5滴8%的三氯化铁。深绿色被解释为苯丙氨酸的阳性试验。另一方面,如果介质变为浅蓝色,则苯丙氨酸测试为阴性。
质量检查
为了进行培养基的无菌控制,应将一或两个肉汤在35°C±0.2下孵育24小时。在此时间之后,不应出现浑浊或颜色变化。
为了进行质量控制,可以使用已知或认证的菌株,例如:产气肠杆菌ATCC 13048,肺炎克雷伯菌ATCC 33945,肠炎沙门氏菌亚利桑那州ATCC 13314和大肠杆菌ATCC 25922。
预期结果是:
- 产气肠杆菌,肺炎克雷伯菌和肠沙门氏菌ssp arizonae产生阳性反应(中等蓝色)。
- 对于大肠杆菌,结果必须为阴性,也就是说,由于葡萄糖的发酵,预期不会有颜色变化(绿色)或变黄。
局限性
请勿使用显示出浑浊,沉淀,颜色变化或任何变质迹象的肉汤。
参考文献
- Pedraza J,Sanandres N,Varela Z,Aguirre E,Camacho J.沙门氏菌属的微生物分离。和分子工具进行检测。Uninorte健康。巴兰基亚(科罗拉多州)2014; 30(1):73-94。网址:scielo.org.co
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- Koneman E,Allen S,Janda W,Schreckenberger P,Winn W.(2004年)。微生物学诊断。第五版。社论Panamericana SA阿根廷。
- 康达Pronadisa实验室。苯丙氨酸丙二酸酯肉汤。可用在:condalab.com