的EC肉汤或液体培养基大肠杆菌是一种选择性液体培养基。标准介质推荐使用这种介质对水和食物样品中的总和粪便大肠菌群进行计数,采用最可能的数字技术(MPN),其中涉及的主要药剂是大肠杆菌。
EC肉汤由三肽,乳糖,胆汁盐,磷酸氢二钾,磷酸二氢钾,氯化钠和水组成。其配方经过战略性设计,有利于总大肠菌和粪便大肠菌的生长,并防止其他伴随微生物的发展。
EC肉汤制备的图形表示。资料来源:Pixabay.com
大肠杆菌是主要的粪便大肠菌,在水和食物中作为污染物存在,是引起重要胃肠道疾病的原因。
应当指出,大肠杆菌有许多血清型。其中我们可以提到肠出血性(EHEC),肠浸润性(EIEC),肠致病性(EPEC),产肠毒素(ETEC)和肠聚集性(EAEC)。
这种介质具有允许所有这些介质发展的能力,但是却不能将它们彼此区分开。这需要其他测试。
以最可能的数字(MPN)进行水和食物的微生物学研究,以搜索总的和粪便的大肠菌群,这是一个包括几个阶段的协议;推定阶段,确认阶段和完成阶段。EC肉汤用于确认阶段。
基础
EC肉汤
EC培养基基于提供总细菌和粪便大肠菌(包括大肠杆菌在内)的最佳发育所必需的营养元素。
这些营养元素由三肽提供,三肽是肽和氨基酸的极好来源。此外,它还含有乳糖,乳糖是一种可发酵的碳水化合物,可提供能量并显示细菌是否产生气体。
另一方面,该培养基含有提供选择性特征的胆盐,因为它抑制了样品中可能存在的革兰氏阳性微生物的生长。
同样,磷酸氢二钾和磷酸一氢钾可作为pH平衡系统。该系统是必需的,因为当肉汤中所含的乳糖被微生物发酵时,往往会酸化培养基,但这可以通过磷酸盐加以补偿。
因此,这些元素是必不可少的,因为不受控制的酸度会影响所寻找微生物的正常发育。
就其本身而言,氯化钠通过渗透作用使介质稳定,而水是存在的溶质的溶剂,并为介质提供液体稠度。
新霉素修饰的EC肉汤
Okrend和Rose创建了多种EC肉汤,称为新霉素修饰的EC肉汤。修饰包括降低胆汁盐的浓度并添加20 mg / dl新霉素。
这种修饰有利于肠出血性大肠杆菌菌株(O157:H7)的恢复。
这种细菌血清型引起严重的出血性结肠炎,可导致溶血性尿毒症综合征(HUS);继而可导致急性肾功能衰竭,高死亡率可达到老年人的50%。
由于食用受污染的食物引起的这种细菌的年度发病率和死亡率,美国农业部(USDA)强烈建议使用这种培养基。
制备
EC肉汤
称重37.4 g脱水培养基,并溶于1升蒸馏水中。该混合物应静置5分钟。随后,在热源中,通过频繁搅拌完成溶解。
溶解后,将其分配到内部装有Durham管的预处理试管中。在121°C的高压釜中灭菌15分钟。
培养基的pH值应为6.9±0.2。脱水培养基的颜色为米色,制备的培养基为浅琥珀色。
将肉汤保存在冰箱中直至使用。使用时,肉汤必须在室温下。
另一方面,EC肉汤也可以以两倍的浓度制备。
新霉素修饰的EC肉汤
称出36.7 g脱水培养基并溶于1升水中。其余准备工作与上述相同。
用
全面和粪便大肠菌群分析
EC肉汤非常适合通过NMP方法进行大肠菌群研究的确证阶段,无论是在水样,药品还是食品中。
在推定阶段获得的混浊的产气乳糖肉汤应重新播种在2%的胆鲜绿色肉汤和EC肉汤中。
对于总大肠菌群,将EC肉汤在37°C的有氧条件下培养24至48小时,对于粪大肠菌群,将其在44°C的有氧条件下培养24至48小时。
在两种情况下,其解释如下:产生气体的混浊管被认为是阳性的。如果24小时内没有气体产生,则孵育持续长达48小时。
EC阳性肉汤进入完整的验证阶段,该阶段包括在选择性培养基(例如Mac Conkey琼脂,EMB琼脂或Endo琼脂)上播种。
如果所用的肉汤是新霉素修饰的EC,建议将阳性试管与山梨糖醇重新接种在Mac Conkey琼脂上。
质量检查
每一批准备好的培养基必须进行质量控制。首先,必须评估培养基的无菌性。从这个意义上讲,一个或两个肉汤在不接种氧的情况下于37°C孵育24小时。预期的结果是透明的肉汤,没有浑浊或颜色变化。
其次,必须评估已知菌株的生长,为此可以使用以下细菌:大肠杆菌,ATCC 8739,大肠杆菌ATCC 25922,鼠伤寒沙门氏菌ATCC 14028。
在所有情况下,都有望获得令人满意的微生物发育,观察到浑浊的肉汤中产生的大肠杆菌气体,而沙门氏菌没有气体。
可以包括在对照中的其他菌株是:金黄色葡萄球菌ATCC 25923,粪肠球菌ATCC29212。这些菌株必须被完全抑制。
建议
-达勒姆管的放置对于大肠菌的研究至关重要。
-在消毒之前(绝不之后)在试管中分配培养基。
-如果介质使用时间超过3个月,请勿使用。
-如果发现介质的通常特性发生任何变化,请不要使用。
参考文献
- 大不列颠实验室。EC中。2015.可用在:britanialab.com
- 肠出血性大肠杆菌。粮食安全和公共卫生中心。2010年可用:cfsph.iastate.edu
- Neogen公司。EC培养基。可在以下网站获得:foodsafety.neogen.com
- Neogen。新霉素修饰的EC培养基。可在以下网站获得:foodsafety.neogen.com
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