的纽鲍尔室,hematometer或血细胞计数器,是由一种特殊的厚玻璃板的实验室仪器。尽管可以用于计数孢子,精子,寄生虫等,但该照相机用于计数某些细胞类型,例如红细胞,白细胞和血小板。
它具有一些非常独特的特征,因为它由3个区域组成,一个中央的用于计数的区域和两个支撑区域。每个腔室都有两个计数区或十字准线,一个在顶部,一个在底部。
Neubauer庭。资料来源:SantiBadia。编辑的图像。
这些具有网格形式的多个划分。计数区域是在两个方格的四个角处找到的中间正方形,再加上中心正方形。
相机的组装必须非常小心,因为任何细节都会影响电池数量。可能会发生许多错误,但是如果发生任何错误,则必须拆卸,清洁并重新组装相机。主要错误包括以下内容:
溢出反应室或未充满,使反应室干燥,尝试用纱布去除多余的液体,运输时倾倒反应室,填充肮脏或潮湿的反应室,未将稀释液或样品充分混合。所有这些错误将导致不真实的价值。
历史
Neubauer室是一种精密仪器,其制造过程经过严格的质量控制。创建它的目的是为了精确计数每mm 3的粒子或形成的元素,例如各种液体中的细胞。其精美的图形刻有钻石笔。
纽鲍尔腔室特征
整个腔室的大小与普通载玻片相同,因此可以将其放置在显微镜载物台上。
腔室由三个中央矩形表面(a,b,c)组成。在区域“ b”中,位于R区域或计数区域,也称为网状网。摄像机两侧各一个,以区域“ d”分隔。
纽鲍尔庭的图示。资料来源:《血液学实用指南》。委内瑞拉卡拉博沃大学生物分析学院。
每个刻度是一个抛光区域,其中包含刻有计数的区域。它由一个表面积为9 mm 2的正方形组成,并在内部分为9个正方形,每个表面积为1 mm 2。四个角正方形分为16个较小的正方形(面积为0.0625 mm 2)。
这些网格由一系列相互交叉的毫米线形成,构成了完美图形化的网格,该网格限定了已指定的测量值。这些线条上刻有钻石尖端。
改良的纽鲍尔网状细胞。资料来源:委内瑞拉卡拉博沃大学生物分析学院血液学实用指南。
四个边对应于计数区域。正是在这些侧面或角落,对大多数细胞(红细胞和白细胞)进行计数,而在中央区域对血小板进行计数。
中心区域划分更多,由1 mm 2的正方形组成,分为25个正方形,每个正方形的表面积为0.04 mm 2。这些又被分成16个网格,面积为0.0025 mm 2。
改良Neubauer网状体的说明。a)拐角正方形,b)中心正方形,c)中心正方形的中间正方形。资料来源:委内瑞拉卡拉博沃大学生物分析学院血液学实用指南。
区域“ a”和“ c”用作放置特殊的盖物的支撑,该盖物称为血量玻片或血球仪盖。
箔纸和计数表面之间的高度为0.1毫米。理货箱的表面积,腔室的高度和样品的稀释度的测量是进行最终计算所需的数据。
应用领域
用于细胞计数。由于它可以计数3个血细胞系列,因此在血液学领域特别有用。即红细胞,白细胞和血小板。
但是,它也可以用于其他领域,例如根据样品类型对精子,孢子,细菌或其他重要物品进行计数。
如何使用?
样品制备
为了进行细胞计数,通常从先前的稀释开始。例如:要计数白细胞,请用Turk's液体制备1:20的稀释液。在装入移液器和安装Neubauer室之前,将稀释液充分混合。
有时候,1:20的稀释度不足以计数。例如,患有某些类型的慢性白血病的患者。在这些情况下,应进行更高的稀释,如1:100。
另一方面,如果计数非常低,例如在严重的白细胞减少症中,可以进行较小的稀释以浓缩样品。例如:您可以按1:10稀释。
所做的更改会影响计算。
纽鲍尔腔室安装
纽鲍尔腔室的组装是通过将血液学载玻片放在中央区域进行的。两者都必须非常干净和干燥。放置薄片时,请抓住边缘并将其轻轻地落在相机上。
通过将Thoma自动移液器或移液器的尖端以35°角放置在装载区的边缘来填充。液体排出顺畅,毛细作用填充了装载区域。这是从两侧进行的,以加载两个十字准线。
标线不应超载,也不应被拒绝为液体。负载必须精确。重要的是,填充必须均匀进行,也就是说,不应有气泡。
组装好腔室后,将其静置2分钟,以使细胞沉淀到底部,并且更易于观察和计数。
休息一段时间后,将其安装在光学显微镜的平台上以进行观察。首先将重点放在10倍目标上,如果有必要,则将其提高到40倍。
为了提高其可视性,减少了来自显微镜的光的通过。为此,降低冷凝器,并稍微关闭隔膜。
数数
对于白细胞或白细胞的计数,必须对四个中间角正方形和每个网状结构的中心正方形的整个表面进行计数。
计数从左上角的正方形开始。您从第一行的第一个正方形开始,即从左到右,直到到达另一端。
在这里,您可以向下浏览并从右向左看,直到到达另一端为止,依此类推,每个网格中的单元格都以之字形计数。计算每个中位数正方形的16个网格。
为了避免对一个单元格进行两次计数,每个网格的边界线上都有关于单元格的规则。左侧和顶部的单元格被计数,而右侧和底部的单元格被忽略。
必须有一个手动单元计数器,以便操作员按观察到的单元次数按设备键多次。通过使用计数器,操作员无需从显微镜视野即可进行计数。在计数结束时,您将看到已计数的总细胞。
计算方式
对于计算,您可以采用几种方法进行。可以对单个刻度进行计数,也可以对两者进行计数,然后对两者进行平均。在这两种情况下,必须将计数的像元乘以一个因子,在这种情况下为40。这样就可以得到每mm 3的总计数。
但是,如果对两个网格进行计数而未取平均值,则必须将其乘以不同的因子,在这种情况下,应乘以20。
-乘数
这是乘法因子的计算方法。
计算时会考虑各种数据,包括稀释滴定度,腔室高度和计数面积。
稀释
对于白细胞计数,使用的标准稀释度为1:20。
箱高
腔室与血细胞片之间的高度为0.1mm。
计数面积
如果对5平方毫米的1mm 2面积进行计数,则意味着总计数面积为5mm 2。该数据必须乘以腔室的高度,以获得计数的总体积。即5mm 2 x 0.1mm = 0.5mm 3。
公式和计算
有了数据,我们说:
如果在0.5 mm 3中-有---计数的细胞数
在1毫米3 ---将存在-X n°个单元
X单元数=(计数的单元数x 1)/ 0.5 mm 3
但是还必须考虑稀释。因此,公式如下:
(细胞数x 1)x 20 / 0.5 mm 3
最后,总而言之,计数的细胞数可以乘以40。因此,获得了每mm 3的白细胞值。
如果对两个标线进行计数,则所计数区域的数据将更改,在这种情况下为10平方,即10 mm 2。总计数体积为1 mm3。计算公式为:
(细胞数x 1)x 20/1 mm 3
因此,在这种情况下,乘法因子为20。
失误
-如果在装入照相机时超过或超过液体,照相机的高度将会变化。这导致计数高于真实事物。如果您尝试用纱布或棉花去除多余的东西,这是一个巨大的错误。此动作将导致细胞集中,增加计数。
-如果加载不佳,则计数将低于实际计数。
-如果已安装相机并使其干燥,则将无法再计数,因为它将产生错误的结果。
-如果样品稀释液在装入反应室之前未充分混合,则存在读数错误的风险,因为细胞将不会均匀分布。因此,取决于样品是分别从液体表面还是从管的底部获取,细胞的浓度会更低或更高。
-气泡的存在减少了必须进入网状结构的液体量,从而干扰了细胞的正确可视化和分布。所有这些都会显着影响结果。
-在计数期间,在完成每个大正方形之前,请勿从显微镜上抬头,以免迷路。
-错误的原因之一是安装后将相机倾斜。因此,必须小心地抬起显微镜台。
建议
如果出于任何原因检测到腔室填充异常,建议您拆开该准备工作,清洁腔室并从头开始重新组装。
清洁相机时请格外小心,以免刮伤十字线。另一方面,要注意的是,血液学幻灯片是脆弱而脆弱的。处理不当会破坏它。
开始计数之前,请确保单元格分布均匀。样品混合或稀释不良会导致细胞分布不均。如果发生这种情况,则必须重复组装。
知道单元格是否分布良好的一种方法是,通过比较每个大正方形的计数,每个正方形所计数的单元格的数量不应相互夸大。
-如果白细胞计数超过50,000 mm 3,建议重复该计数,进行更大的稀释。
-如果更改稀释倍数,则必须重新计算倍增因子,因为这会影响公式。
参考文献
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