所述缩二脲是用于蛋白质测定的长链和短链的试剂。它特别用于分析化学和尿液分析领域，以研究血清，血浆和尿液中总蛋白质的浓度。
在某些病理中蛋白质值可以增加或减少。低蛋白血症症状通常发生在患有肾脏疾病的患者，营养不良的患者以及患有慢性感染的患者中。
在Biuret反应正Biuret测试中形成的配合物的化学结构。资料来源：Yikrazuul / flickr
虽然在诸如多发性骨髓瘤，系统性红斑狼疮，细菌性心内膜炎，细菌性脑膜炎，Waldenstrom巨球蛋白血症等病理中观察到高蛋白血症。
另一方面，尿液中蛋白质的存在是由于肾脏对白蛋白的过滤。这是必须研究的病理行为。
从这个意义上讲，Biuret十分有用，因为它可以量化血清，血浆，尿液以及许多其他样品中蛋白质的存在。
甚至Biuret也可用于研究在探索不充分的样品或未知组成的样品中蛋白质的存在和浓度。因此，它被广泛应用于研究领域。
缩二脲测试基于检测肽键。该测试在碱性介质中进行。样品必须包含至少两个肽键才能形成紫-紫色复合物。通过键和铜离子的结合形成络合物。
基础
缩二脲的试剂由氢氧化钾，硫酸铜，酒石酸钠和酒石酸钾组成。氢氧化钠用于碱化介质，因为该条件对于反应的发生至关重要。
与蛋白质反应的物质是硫酸铜，而酒石酸钠具有不允许形成氢氧化铜的功能，氢氧化铜易于沉淀并干扰反应。
如果在样品中发现具有肽键的物质（多肽或蛋白质），则测试为阳性。
当溶液变成紫色时，反应被解释为阳性。通过在至少两个具有CO-NH基团和铜阳离子的肽键之间形成络合物来产生颜色。
紫色络合物可以通过两种方式形成：一种是通过与金属结合的酰胺基团失去质子（去外延），另一种是通过自由和结合的氧和氮电子的结合与铜。
该反应的强度和颜色可以变化，具体取决于蛋白质的类型。
可以定性或定量地进行测试。以定性形式报告为阳性或阴性。当以定量形式存在时，浓度可以通过分光光度法测量。
在540-560nm之间读取反应。颜色的强度与样品中肽键的浓度成正比。
试剂种类
-20％氢氧化钠（NaOH）
-五水硫酸铜1％（CuSO 4. 5H 2 O）
-酒石酸钾钠和钾四水合物混合液（KNaC 4 H 4 O 6 ·4H 2 O）
缩二脲试剂的稳定性
-必须冷藏。
处理
技术
-将100 µl待分析的样品或标准品放入试管中。
-加入2毫升氢氧化钠。
-混合很好。
-加入5 ml的缩二脲试剂。
-在室温下混合并静置25分钟，遮盖并避光。
-观察是否形成颜色并用分光光度法测量。
校正曲线
牛血清白蛋白可以用作执行校准曲线的标准。由此制备了各种浓度。例如25％，50％，75％，100％，125％和150％。
以所有这些已知浓度建立反应，并在540 nm波长读取吸光度。利用已知浓度的数据和吸光度读数，可以绘制校准曲线。
在每次测定或批次处理的样品中，建议安装标准品。牛血清白蛋白0.1-2 mg / ml可用作校准标准。
在分光光度计上在540 nm下进行测量。
线性度最高可达到12 g / dl。
干扰
干扰Biuret测试的物质
尽管不是很频繁，但应注意，某些物质可能会在执行此测试期间产生干扰。例如，氨的存在可以抑制颜色形成。
同样，其他物质也可以吸收相同的波长，例如某些颜料。
另一方面，当肽键以外的物质与铜盐形成络合物时，会产生干扰。例如：一些碳水化合物和某些脂质。
如果要分析的样品出现某种类型的沉淀物，则在安装测试之前必须将其过滤或离心。
不干扰Biuret测试的物质
该测试不受以下条件的影响：
-胆红素浓度最高为20 mg / dl。
-血红蛋白浓度可达750 mg / dl。
-Dextran的浓度高达30 g / L。
-甘油三酸酯的浓度高达4000 mg / dl。
优点
-这是一种简单的执行方法。
-这是一项经济考验。
-对蛋白质具有高特异性。
-干扰小。
缺点
检测少量蛋白质的灵敏度较低。Fuentes等人所做的工作证实，Biuret测试方法的蛋白质检出限为1 mg / ml，定量限为3 mg / ml。
但是，在亚马逊大学进行的其他研究表明其价值要低得多。该研究报告的检出限为0.020 mg / ml，定量限为1.33 mg / ml。
应用领域
Biuret试剂或检测试剂可用于常规实验室和研究实验室中临床和非临床样品中蛋白质的测定。
随着增加或减少而发生的病理
在许多病理学中，重要的是确定临床样品中总蛋白的浓度，该浓度可以升高或降低。
它们位于：
-多发性骨髓瘤，
-系统性红斑狼疮，
-细菌性心内膜炎，
-细菌性脑膜炎，
Waldenstrom的巨球蛋白血症等。
在以下方面减少：
-肾功能不全，
-严重营养不良的人，
-患有慢性感染的患者。
临床样本
最常见的临床样本是血清，血浆和尿液。血清或血浆中蛋白质的正常值为6.0-8.8 gr / dl。
成人尿液中蛋白质的浓度不超过150毫克/ 24小时。
尿蛋白/尿肌酐比例正常值
婴儿：<0.50毫克
2岁及以上的儿童：指数：0.20毫克
成人：<0.2毫克
非临床样品
缩二脲反应可用于多种类型的非临床样品，例如乳制品，抗蛇毒血清或要调查其蛋白质存在的任何未知物质。
参考文献
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