在组织化学是在不同的生物组织(植物和动物)的形态的研究的有用工具由于组织成分例如碳水化合物,脂质和蛋白质,除其他外,化学染料的其反应原理。
这个有价值的工具不仅可以识别组织和细胞的组成和结构,还可以识别其中发生的各种反应。同样,可以证明由于微生物的存在或其他病理引起的可能的组织损伤。
组织化学污渍。尼罗河病毒,革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌(Gram),荚膜组织胞浆菌(Grocott),结核分枝杆菌(Ziehl Neelsen)。资料来源:Pixinio.com/Wikipedia.org/Nephron/CDC/Dr。乔治·库比卡
过去几个世纪以来的组织化学已经做出了重要贡献,例如Paul Ehrlich证明了血脑屏障的存在。这是可能的,因为Ehrlich使用的实验动物的大脑没有被碱性染料苯胺染色。
为了染色不同类型的细胞,这导致了使用各种染料,例如亚甲蓝和吲哚酚。根据细胞的特异性染色,这一发现导致细胞分为嗜酸性,嗜碱性和嗜中性。
最近的研究已应用该技术来显示Litsea glaucescens物种(更好地称为月桂树)的组织中存在多种化合物,包括酚,碳水化合物和非结构性脂质。在树叶和树林中都能找到它们。
同样,Colares等人(2016年)使用组织化学技术鉴定了具有药用价值的植物Tarenaya hassleriana。在该物种中,存在淀粉,肉豆蔻以及酚和亲脂性化合物。
基础
组织化学基于组织中存在的细胞结构或分子的染色,这要归功于它们与特定染料的亲和力。这些结构或分子以其原始格式的着色反应随后在光学显微镜或电子显微镜中可视化。
染色的特异性是由于细胞或组织分子中存在离子接受基团。
最后,组织化学反应的目的是能够通过染色显示出来。从最大的生物结构到最小的组织和细胞。由于染料与组织,细胞或细胞器的分子发生化学反应,因此可以实现这一点。
检控
组织化学反应可能涉及执行该技术之前的步骤,例如组织的固定,包埋和切割。因此,必须考虑到,在这些步骤中,即使要识别的结构也可能会损坏,从而产生假阴性结果。
尽管如此,正确进行组织的事先固定很重要,因为它可以防止自溶或细胞破坏。为此,化学反应与有机溶剂一起使用,例如:甲醛或戊二醛等。
包含织物是为了使其在切割时保持其硬度并因此防止其变形。最后,用切片机进行切割,以通过光学显微镜研究样品。
此外,在进行组织化学染色之前,建议在每批测试中均包括外部或内部阳性对照。以及将特定的染料用于要研究的结构。
组织化学污渍
从组织化学技术的出现到现在,已经使用了广泛的污渍,包括最常用的污渍,例如:高碘酸希夫(PAS),Grocott,Ziehl-Neelsen和Gram。
同样,其他染料的使用频率也较低,例如印度油墨,兽蜡或马森三色染料等。
高碘酸希夫(PAS)
通过这种着色,可以观察到碳水化合物含量高的分子,例如:糖原和粘蛋白。但是,它也可用于鉴定微生物,例如真菌和寄生虫。除了皮肤和其他组织中的某些结构(基底膜)。
这种染色的基础是该染料氧化了两个附近羟基之间的碳键。产生醛基的释放,然后通过席夫试剂检测到,发出紫色。
Schiff试剂由碱性品红,焦亚硫酸钠和盐酸组成,当存在醛基时,这些成分会导致紫色。否则产生无色酸。
着色的强度将取决于单糖中存在的羟基的数量。例如,在真菌,基底膜,粘蛋白和糖原中,颜色可以从红色变为紫色,而细胞核则染成蓝色。
格罗科特
它是在石蜡包埋的组织中鉴定真菌时灵敏度最高的污渍之一。这样可以鉴定各种真菌结构:菌丝,孢子,内生孢子等。因此,它被认为是诊断真菌病的常规染色剂。
它特别用于诊断由肺孢子虫属和曲霉属的某些真菌引起的肺真菌病,例如肺气肿病和曲霉病。
该溶液包含硝酸银和铬酸,后者是固定剂和着色剂。理由是该酸通过存在于真菌结构中,例如真菌的细胞壁中的粘多糖类,将羟基氧化为醛。
最后,溶液中存在的银被醛氧化,引起黑色,这被称为argentafin反应。也可以使用对比染料,例如浅绿色,因此将以浅绿色背景的黑色观察到真菌结构。
齐尔·尼尔森
这种染色是基于在某些微生物(如诺卡氏菌,军团菌和分枝杆菌属)中部分或全部存在酸-醇抗性。
推荐使用这种染料,因为前面提到的微生物的细胞壁中含有复杂的脂质,阻碍了染料的渗透。特别是在呼吸道样本中。
其中,使用了强着色剂,如胭脂红紫杉醇(碱性着色剂),并加热使微生物能够保留该着色剂,并且不会因酸和醇而变色。最后,施加亚甲蓝溶液使已变色的结构着色。
在染成红色的结构中观察到了耐酸酒精性,而不抵抗褪色的结构被染成蓝色。
克和中国墨水
革兰氏染色是诊断细菌和真菌感染等的非常有用的染色剂。这种染色可以区分革兰氏阳性和阴性菌,清楚地显示出细胞壁组成中存在的差异。
印度墨水是一种染色剂,用于对比含有多糖(胶囊)的结构。这是因为新环境隐球菌中可能在环境中形成环。
Orcein
通过该染色,各种细胞的弹性纤维和染色体被着色,从而可以评估后者的成熟过程。因此,它在细胞遗传学研究中非常有用。
这是基于存在于多种细胞核中的诸如DNA之类的分子的负电荷吸收染料。因此这些被染成蓝色到深紫色。
马森三色
该色斑用于识别某些含有黑色素的微生物或材料。这是霉菌病的病因,它是由皮肤病真菌,脱发性真菌病和黑麦芽孢杆菌引起的。
最后的想法
近年来,在创建新的诊断技术方面取得了许多进展,新诊断技术涉及组织化学,但与其他基本原理或原理相关。这些技术具有不同的目的,例如在免疫组织化学或酶组织化学的情况下。
参考文献
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