所述细菌涂片是薄膜涂片中的悬浮液细菌的微生物，其在光学显微镜下在透明玻璃板或滑动制成，观测的。
为了尽可能地分离微生物，进行薄膜形式的延伸，因为如果将它们分组，则观察不清楚。
图1.在扫描电子显微镜下看到的细菌涂片。资料来源：pixbay.com
在细菌培养的研究中，涂片准备，固定和染色技术用于更好地分析它们。由于微生物的尺寸小，观察它们必须使用光学显微镜。
光学显微镜是观察涂片的必不可少的工具。这些采用光学透镜和光，可以高倍放大地观察样品。
通常，活细胞几乎没有彩色结构，用光学显微镜观察，它们是无色透明样品，它们与环境之间几乎没有内部对比。
在不使用辅助染色技术的情况下，使用简单的明场光学显微镜观察非常有限，并且仅在某些情况下使用，例如观察微生物的运动。
为了最佳观察微生物，必须在对比度和分辨率之间取得平衡。即使在高分辨率下，也无法在显微镜下看到细胞的细节。通过染色技术需要使用染料，该技术可为观察提供对比。
优质细菌涂片的特征
出色的对比度
为了获得出色的对比度，有称为相衬显微镜，微分干涉显微镜和暗场显微镜的精密显微镜。这种显微镜用于观察细菌结构，例如鞘和细丝等。
染色是一种增加明场显微镜获得的对比度的简单技术。在该技术中，可以使用不同的污渍，这可以显着改善显微镜观察。
直接在载玻片上的微生物悬浮液的涂片或延伸部分上直接进行染色，事先将其干燥并固定。
好修复
固定是一种用于保存细胞结构的技术。导致微生物失活并粘附在载玻片的玻璃上。有不同的固定方法：热固定和化学固定。
热固定
这是观察细菌涂片的最广泛使用的方法。该技术包括使涂片的细菌悬浮液通过打火机的火焰。该技术能够保留细菌的外部形态，但破坏其内部结构。
化学固定
化学固定使用防腐化学品，例如甲醛或福尔马林，乙醇和乙酸等。使用化学固定剂的优点是实现了微生物内部细胞结构的保存。
图2。血液涂片。来源：Bobjgalindo，来自Wikimedia Commons
染色好
对先前干燥和固定的涂片进行染色的最常见程序是阳性或简单染色，差异染色和阴性染色。还存在用于染色特定细胞结构（胶囊，孢子，鞭毛）的特殊技术。
阳性染色或简单染色
阳性或简单染色是最广泛使用的涂片染色技术。它使用的染料具有结合某些微生物结构的能力，因此可以在显微镜下对其进行观察。
这些染料的化学结构具有发色团（有色部分），具有交替的双键和单键（共轭）。这些键又可以与某些细胞结构建立离子键或共价键。
用于阳性或简单染色的染料大部分是苯胺的化学衍生物（有色有机盐）。
另一方面，在染料中，我们可以找到一些具有碱性pH值的染料和其他具有酸性pH值的染料。
基本色料
在碱性染料中，生色团具有正电荷。绝大多数原核微生物具有中性的内部pH值，并且它们的细胞表面带负电。通过这种静电相互作用，发色团结合到细胞上并对其染色。
碱性染料的实例是亚甲基蓝，结晶紫，孔雀石绿，碱性品红，藏红素等。
酸性染料
在酸性染料中，生色团具有负电荷。这些用于染色带正电荷氨基的蛋白质。酸性染料的实例为酸性品红，孟加拉红，刚果红和曙红。
差异染色
差异染色技术包括在显微镜下使用两种颜色或强度不同的染料来区分不同的微生物。革兰氏染色和耐酸-醇性染色是细菌学中最常用的差异染色。
革兰氏染色剂用作初步测试，以了解形状，大小，细胞分组以及细胞壁的类型。使用革兰氏染色试验，将细胞壁细菌分为革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌。
负染
在这种技术中，使用的化学染料不渗透细胞内部，而是使微生物在其中出现的培养基呈现黑色背景。
在负性染色技术中，涂片是由一滴印度墨水或黑素菌素悬浮液制成的，这些悬浮液在室温下干燥后会形成一层不透明的薄膜，以防止光线通过。这样，微生物在深色背景上显示为明亮的形状。
制备
A.涂片
1.-很好地清洗幻灯片，用吸水纸擦干并贴上标签。标签必须标明制剂的内容，日期和加工者的姓名。
2.-点燃打火机，并对火焰中的接种环进行消毒，直到鲜红色。
3.-让手柄冷却。
4.-取下细菌培养管，取下盖子，并迅速通过燃烧器火焰附近的管口（火焰）。
5.-将接种环插入装有细菌培养物的试管中并取样。
6.-如果培养物在液体培养基中，请将用手柄抓取的样品放在载玻片的中心，然后小心地将其沿直径约2 cm的圆铺开。
7.-再次消毒接种环。
8.-让涂片在空气中干燥。
9.-重复步骤3至8三次。
10.-如果培养物在固体培养基中，则必须事先在玻片上滴一滴蒸馏水。按照步骤2至5（无菌条件）的指示，将带有接种环的少量培养物样品混合在一起。
11.-将稀释的样品与水滴一起铺在玻片上，重复3次。
B.固定
1.-从液体培养基中的培养物中，向干燥的涂片中加入两滴甲醇或无水乙醇。
2.-让空气干燥远离打火机。
3.-如果涂片来自固体培养基中的培养物，则干燥的涂片会被加热固定，使其迅速通过较轻火焰最热部分的2至3次。
4.-用左手的背侧接触涂片的下部（对于右手；否则，请使用右手）并确认其是否冷。
C.简单染色
1.-将2滴选定的污渍滴入涂片中，并使其在每种污渍的特定操作规程所需的时间内起作用（通常在1至5分钟之间）。
2.-某些污渍需要加热才能激活它们，在这种情况下，在较轻的火焰中加热玻片时必须非常小心（用镊子进行处理，避免沸腾）。涂片过热会破坏要观察的细胞。
3.-用蒸馏水从小墨镜中冲洗掉多余的着色剂。轻轻敲打在工作台上倾斜的边缘，以除去洗涤水。
4.-晾干。
5.-根据观察的类型，在此阶段是否使用盖玻片。盖玻片可保护和保留涂抹。如果在此阶段进行油浸观察，则不使用盖玻片，但无法保留涂片。
D.明确保存涂片
1.-将涂片依次浸入以下所示的每种溶液中至少5分钟。这些“沐浴”的目的是使涂抹完全脱水。在将涂片引入下一个浴池之前，应彻底排干每种试剂。
脱水浴的顺序如下：
- 乙醇70％
- 乙醇95％
- 纯丙酮
- 丙酮-二甲苯酚1：1混合物
- 木糖醇
然后风干。
2.-使用加拿大香脂或其他安装介质安装盖玻片，最好为22×22 mm。
参考文献
- Briggs，G。（1965）。微生物实验室事故和感染的因果关系。美国陆军生物实验室。德里克堡。
- Cappucino，JG和Welch，CT（2017）。微生物学：实验室手册。皮尔森
- Holt，JG编辑。（1977）。较短的Bergey确定性细菌学手册。第 8 巴尔的摩：威廉姆斯和威尔金斯公司。
- 约翰逊，TR和凯斯；CL（2018）。微生物学实验室实验。皮尔森
- Tille，P.（2017年）。诊断微生物学。美国第 14 大街：美国Elsiever，Inc.