的大豆肉汤胰蛋白胨是液体培养基,高营养,非选择性。由于它的多功能性,它是微生物实验室中使用最广泛的液体培养基之一。
它也以胰蛋白酶大豆肉汤或消化酪蛋白大豆的名称而闻名,其缩写是英语的胰蛋白酶胰蛋白Try大豆肉汤为TSB或西班牙语的缩写为CST。由于其成分,其用途非常不同。它由三肽,大豆蛋白ept,氯化钠,磷酸氢二钾和葡萄糖组成。
用铜绿假单胞菌ATCC 27853菌株接种的胰蛋白酶大豆肉汤,其中观察到色素生成。资料来源:作者MSc摄。Marielsa Gil。
它能够繁殖临床上重要的病原细菌,包括那些需要营养的细菌和厌氧细菌。在这种环境下也可能产生一些机会性和污染性真菌。
由于它具有很高的营养能力,因此对微生物污染的检测具有很高的灵敏度,因此,它被美国农业部动植物健康检查服务局选择用于疫苗的微生物学分析。
同样,胰蛋白酶大豆肉汤可满足不同药典(欧洲EP,日本JP和北美USP)对工业水平产品(如化妆品和食品)进行微生物研究的要求。
另一方面,值得一提的是,尽管其用途广泛,但该介质相对便宜,因此对于大多数微生物实验室而言,它都是负担得起的。这也很容易准备。
基础
雷公藤酮,蛋白ept和葡萄糖提供必要的营养特性,使其成为微生物快速生长的理想培养基。
在大约6到8个小时的温育中,大多数微生物已经可以看到生长。但是,有些菌株生长缓慢,可能需要几天的时间才能生长。
氯化钠和磷酸氢二钾分别充当渗透平衡和pH调节剂。培养基中混浊的出现证明了生长的存在。如果没有生长,则培养基保持半透明。
由于其浅色,可以观察到颜料的产生,例如位于文章开头的图像中所示的颜料,它对应于铜绿假单胞菌产生的颜料。
制备
-Triptysein大豆汤
要制备胰酶解大豆肉汤,必须在数字秤上称重30 g脱水的商业培养基。然后将其溶于装有烧瓶的一升蒸馏水中。
将该混合物静置5分钟,然后将其带至热源以帮助溶解介质。煮沸1分钟时应经常搅拌。
溶解后,可根据需要分配到适当尺寸的试管中。可以使用带有棉塞或胶木盖的管。随后,将管在高压釜中在121°C下用培养基灭菌15分钟。
培养基的pH值必须保持在7.3±0.2
应当注意的是,脱水培养基的颜色是浅米色,应在10至35°C的干燥环境中保存。制备的肉汤呈淡琥珀色,应保存在冰箱中(2至8°C)。
-胰蛋白酶消化大豆肉汤的品种
可以通过添加胆汁盐和新霉素来制备改良的胰蛋白酶大豆肉汤,使其对分离大肠杆菌具有选择性。出于相同目的的另一种选择是准备添加万古霉素,头孢克肟和亚碲酸盐(2.5 µg / ml)的胰蛋白酶解冻大豆肉汤。
另一方面,当目的是刺激生物膜形成时,可以向胰蛋白酶大豆肉汤中添加更多的葡萄糖(0.25%)。
用
它具有足够的营养,可让需要挑剔或挑剔的细菌(如肺炎链球菌,链球菌和布鲁氏菌)生长,而无需补充血液或血清。
同样,在这种肉汤中可以生长一些真菌,例如白色念珠菌复合体,曲霉菌和荚膜组织胞浆菌。
此外,在厌氧条件下,该培养基对于回收属于梭状芽胞杆菌属的细菌以及具有临床重要性的非孢子型厌氧细菌是理想的。
如果添加6.5%的氯化钠,则可用于肠球菌和其他D组链球菌的生长。
在研究水平上,它在各种协议中都非常有用,特别是在生物膜或形成生物膜的细菌的研究中。它也用于通过Kirby和Bauer方法制备执行抗菌素检测所必需的0.5%Mac Farland细菌悬浮液。
在这种情况下,取3至5个外观相似的菌落,并在4-5毫升的胰蛋白酶蛋白酶大豆肉汤中乳化。然后将其在35-37°C下孵育2至6小时,然后使用无菌盐水将其调节至所需浓度。孵育18至24小时后,请勿使用胰蛋白酶大豆肉汤。
播种
样品可以直接播种,也可以将取自选择性培养基的纯菌落继代培养。接种物应小,以免在培养前使培养基混浊。
通常将其在需氧条件下于37°C孵育24小时,但这些条件可能会因所寻找的微生物而异。如果需要,也可以在厌氧条件下于37°C孵育几天。例如,快速生长或挑食性微生物最多可孵育7天。
在对药物(例如疫苗)进行微生物学分析时,协议更加严格。在这些情况下,没有生长的肉汤要连续培养14天后才能丢弃。
质量检查
从准备的每批样品中,应孵育1或2个未接种的试管以证明其无菌性。它必须保持不变。
还可以种植已知菌株以评估其行为。可以使用的菌株包括:
巴西曲霉ATCC 1604,白色念珠菌ATCC 10231,枯草芽孢杆菌ATCC 6633,金黄色葡萄球菌ATCC 6538或25923,大肠杆菌ATCC 8739,化脓性链球菌ATCC 19615,肺炎链球菌ATCC28CC305,肺炎球菌ATCC28CC305,肺炎
在所有情况下,每种微生物在适当的大气和温度条件下的生长必须令人满意。
局限性
-由于产生酸,葡萄糖的发酵导致培养基的pH降低。对于某些对酸度敏感的微生物的生存,这可能是不利的。
-不建议用于维持菌株,因为除酸度外,细菌还会在几天后消耗营养,并随之导致有毒物质积聚,使环境变得荒凉。
-由于肉汤容易被污染,因此您必须遵守所有无菌规程。
-在准备好胰蛋白酶大豆肉汤后,请勿尝试将肉汤转移到另一个无菌试管中,因为这种操作非常容易受到污染。
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