的MIO介质是用于在属于肠杆菌科的细菌的种类的识别,以帮助一个生化试验。它营养丰富,由葡萄糖,酵母抽提物,蛋白ept,三肽,L-鸟氨酸盐酸盐,溴甲酚紫和琼脂组成。
首字母缩写词(MIO)的含义描述了在该介质中可以观察到的每个参数。活力,吲哚和鸟氨酸。运动性是由于鞭毛的存在而使微生物移动的能力。为了观察该特性,培养基的稠度必须是半固体,因此制剂中所含的琼脂较少。
MIO介质中结果解释的大纲。资料来源:作者MSc编写。玛莉莎·吉尔(Marielsa gil)
吲哚的产生表明存在作用于氨基酸色氨酸的色氨酸酶色氨酸,需要使用显像试剂才能使吲哚的产生可见。
最终,鸟氨酸确定细菌是否能够使氨基酸脱羧,即,是否具有奥氏乙胺脱羧酶。
基础
蛋白ept,酵母提取物和三叉蛋白
这些元素有助于这种培养基的营养。它们充当细菌发育所需的营养物质和必需氨基酸。
此外,三联蛋白是色氨酸的来源,表明色氨酸酶的存在,色氨酸酶通过还原性脱氨作用降解色氨酸,释放出吲哚,丙酮酸,氨和能量。
吲哚是无色的,因此通过添加五滴Ehrlich或Kovacs试剂(均与对二甲基氨基苯甲醛一起)来揭示吲哚的存在。
该化合物的醛基与吲哚反应,在琼脂表面上生成环状紫红色。
任何颜色的痕迹都应视为阳性测试。校样应立即读取,因为随着时间的流逝颜色会降低。
此外,应在注意到鸟氨酸的运动性和脱羧结果后再进行该试验。
解释
阳性试验:添加滴Kovacs试剂时形成紫红色的红色环。
阴性测试:无环形成。
动力性
如果观察到混浊的培养基或在初次接种附近有较粗的生长线,则细菌移动的能力将很明显。
通过观察生长的细线,可以证明运动测试为阴性,并且周围的一切都将没有生长。
重要的是,在显示吲哚之前先读取运动性,因为添加试剂会覆盖整个培养基。
在流动但生长缓慢的细菌中,很难证明其在这种培养基中的运动能力。在这种情况下,建议使用其他测试或方法,例如中等运动性或待滴方法。
葡萄糖
葡萄糖是可发酵的碳水化合物,除了提供能量外,它还能酸化环境,这是氨基酸鸟氨酸脱羧发生的必要条件。
从所有属于肠杆菌科的细菌发酵葡萄糖的原理开始,葡萄糖的发酵必须始终发生。
鸟氨酸
万一细菌产生鸟氨酸脱羧酶,一旦培养基被葡萄糖发酵酸化,它就会起作用。
鸟氨酸脱羧酶作用在氨基酸的羧基上,产生称为腐胺的胺,该胺再次使培养基碱化。
孵育24小时后,应阅读此测试,因为如果您尝试阅读,则可能会误判该测试为假阴性。
应当记住,发生的第一个反应是葡萄糖的发酵,因此培养基在初始阶段(前10到12小时)变成黄色。如果随后发生鸟氨酸脱羧,培养基将变成紫色。
在显示吲哚之前解释鸟氨酸脱羧测试很重要,因为添加Kovacs试剂会改变培养基的颜色。
解释
阴性测试:带有黄色或黄色背景的介质。
阳性测试:中等完全紫色。
PH指示
在这种情况下,使用溴甲酚紫。负责揭示培养基中pH值何时发生变化的人。酸化后,指示剂变为黄色,碱化后,指示剂变为紫色。
播种发育技术
为了播种MIO培养基,使用直环或针,并收集一部分要研究的菌落。
在MIO的中间沿直线进行深孔穿刺。不建议进行两次穿刺,因为如果未在同一位置进行穿刺,可能会给人以虚假的运动印象。
在需氧条件下于37°C孵育24至48小时。按以下顺序查看结果:运动性,鸟氨酸的脱羧作用并最终显示出吲哚。
建议无菌除去2 ml培养基,将其转移到无菌试管中并在那里进行吲哚测试,这样如果阴性,则可以将原始试管的其余部分再孵育24小时,以再次显示吲哚。
吲哚的显影过程如下:将3至5滴Kovacs试剂加入MIO介质中并剧烈搅拌。观察是否出现红紫红色的环。
制备
MIO媒体
称出31 g MIO介质,并溶于一升蒸馏水中。
加热直至混合物沸腾一分钟,频繁摇晃直至琼脂完全溶解。将4 ml培养基分配到带棉帽的13/100试管中。
在121°C的高压釜中灭菌15分钟。从高压釜中取出,使其在架子上直立,以形成半固态块。
存储在2-8°C的冰箱中。在播种细菌菌株之前先使其升温。
脱水培养基的颜色为米色,制得的培养基的颜色为淡乳白色紫色。
制备的培养基的最终pH为6.5±0.2
该介质在酸性pH下变为黄色,在碱性pH下为紫色。
Kovacs试剂(吲哚测试开发人员)
该试剂的制备如下:
测量150 ml的戊醇,异戊醇或丁醇(这三种中的任何一种)。将10克对-二甲基氨基苯甲醛溶解在其中。随后缓慢加入50ml浓盐酸。
制备的试剂为无色或浅黄色。应将其保存在琥珀色的瓶子中,并保存在冰箱中。深褐色显示其劣化。
Kovacs试剂也可以代替Ehrlich试剂。后者更敏感,因此优选在少量产生细菌的细菌中发现吲哚,例如在某些非发酵革兰氏阴性杆菌和某些厌氧菌中。
用
这种培养基是对一系列生化测试的补充,用于鉴定属于肠杆菌科的细菌。
鸟氨酸脱羧数据用于区分测试阳性的波氏志贺氏菌与测试阴性的波氏志贺氏菌,弗氏志贺氏菌和痢疾链球菌。
它还将测试阴性的克雷伯氏菌属与肠杆菌属(大多数肠杆菌属阳性)区分开来。
资料来源:Koneman E,Allen S,Janda W,Schreckenberger P,Winn W.(2004年)。微生物学诊断。第五版。社论Panamericana SA阿根廷。
质量检查
每次准备一批MIO介质时,都可以执行对照测试。为此,使用已知或认证的菌株来观察培养基的行为。
可以使用的菌株是大肠杆菌,摩根氏摩根氏菌,肺炎克雷伯菌,产气肠杆菌和奇异变形杆菌。
预期的结果是大肠杆菌和摩根氏菌。Dan M:+,I:+和O:+。
肺炎克雷伯菌均为阴性(M:-,I:-,O :-)。奇异变形杆菌和产气肠杆菌产生M:+ I:-和O:+。
参考文献
- Mac Faddin J.(2003)。生化测试用于鉴定具有临床重要性的细菌。第三版。社论泛美。布宜诺斯艾利斯。阿根廷。
- 福布斯(Forbes B),萨姆(Sahm D),韦斯菲尔德(Weissfeld)A.(2009)。Bailey&Scott微生物学诊断。12版。社论Panamericana SA阿根廷。
- Koneman E,Allen S,Janda W,Schreckenberger P,Winn W.(2004年)。微生物学诊断。第五版。社论Panamericana SA阿根廷。
- 大不列颠实验室。MIO Medio 2015,可在:britanialab.com上获得
- BD实验室。BBL动力性吲哚鸟氨酸(MIO)培养基。2007。可在以下网站找到:bd.com
- Valtek实验室。MIO动力中等,吲哚,鸟氨酸。2010年可用:andinamedica.com