ZIEHL-NEELSEN染色剂：原理，试剂和技术 - 生物学 - 2025

所述抗酸着色技术来识别微生物耐醇烯酸（ARA）。这种微生物学程序的名称指的是它的作者：细菌学家Franz Ziehl和病理学家Friedrich Neelsen。

这项技术是一种差异染色技术，它意味着使用不同的染料，以便在要观察，区分和以后识别的结构之间建立对比。Ziehl-Neelsen染色剂用于鉴定某些类型的微生物。

Ziehl-Neelsen染色

这些生物中有一些是分枝杆菌（例如结核分枝杆菌），诺卡氏菌（例如Nocardia sp。）和一些单细胞寄生虫（例如小隐孢子虫）。许多细菌可以通过称为革兰氏染色的通用技术进行分类。

但是，某些细菌群体需要其他方法才能识别它们。Ziehl-Neelsen染色等技术需要结合染料和加热才能将染料固定在细胞壁上。

然后是漂白过程，它有两个结果：对酸和醇变色的抵抗力或敏感性。

基础

这种染色技术的原理是基于这些微生物的细胞壁的特性。壁是由一种叫做霉菌酸的脂肪酸组成的。这些特征是具有非常长的链。

当脂肪酸具有非常长的结构时，它们可以更轻松地保留染料。由于细胞壁中的霉菌酸含量高，某些细菌属很难用革兰氏染色法染色。

Ziehl-Neelsen染色剂使用碱性化合物酚类化合物紫红色品红。它具有与细胞壁脂肪酸相互作用的能力，该脂肪酸在室温下呈蜡状。

在加热条件下，碳水化合物的品红染色会增强，因为蜡会融化，并且染料分子会更快地移入细胞壁。

后来使用的酸会使没有被染色的细胞脱色，因为它们的壁与染料没有足够的关系。因此，酸性漂白剂的强度能够去除酸性染料。抵抗这种变色的细胞称为耐酸的。

次要着色剂

样品脱色后，与另一种称为第二染料的染料进行对比。通常，使用亚甲基蓝或孔雀石绿。

第二染料染色背景材料，因此与第一步染色的结构形成对比。只有变色的细胞会吸收第二种染料（变色剂）并呈现其颜色，而耐酸的细胞则保留其红色。

该程序通常用于鉴定结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌，它们被称为耐酸杆菌。

试剂种类

主色料

使用0.3％的品红品红（已过滤）。该染料是由以下醇类混合物制备的：苯酚在乙醇中的比例为90％，在甲醇中的比例为95％，在该混合物中溶解了3克碱性品红。

漂白液

在该步骤中，可以使用3％的乙醇溶液或25％的硫酸溶液。

二次染料（对付染料）

最常用于对比样品的染料通常是0.3％的亚甲基蓝。但是，也可以使用其他材料，例如0.5％的孔雀石绿。

技术

耐酸染色程序

准备细菌涂片

按照无菌预防措施，在干净，干燥的载玻片上进行此准备。

涂片干燥

让涂片在室温下干燥。

加热样品

应通过在下面的载玻片上放火来加热样品。如果未准备好痰涂片（用次氯酸钠处理以使其变白），并且不打算立即染色，则可以进行酒精固定。

用漂白剂在染色过程中去除结核分枝杆菌。对未经治疗的痰进行热固定不会杀死结核分枝杆菌，而酒精固定则具有杀菌作用。

遮盖污渍

污渍被碳水化合物的品红溶液覆盖（主要碱性污渍）。

加热污渍

完成5分钟。您应该注意到有蒸汽逸出（大约60°C）。重要的是不要过热并避免燃烧样品。

关于加热污渍，在加热甲醇品红时必须格外小心，特别是如果在托盘或其他容器中进行了染色的情况下，在该托盘或其他容器中已收集了先前染色的高度易燃化学品。

使用预先点燃的棉签蘸几滴酸性酒精，甲醇或70％的乙醇，只能在玻片下方施加小火焰。避免使用浸有乙醇的大棉签，因为这有引发火灾的危险。

洗去污渍

必须用清水清洗。如果自来水不干净，则最好用过滤水或蒸馏水清洗涂片。

用酸性酒精覆盖涂片

该酸性酒精含量应为3％。覆盖进行5分钟或直到涂片充分变色，即浅粉红色。

必须考虑到酸性酒精易燃。因此，必须非常小心地使用它。避免靠近火源。

洗去污渍

洗涤应使用干净的蒸馏水。

用污渍覆盖涂片

它可以是孔雀石绿（0.5％）或亚甲蓝（0.3％）染色1至2分钟，如果涂抹较薄，则需要更长的时间。

洗去污渍

再次应使用干净的（蒸馏水）。

排水

应清洁载玻片的背面，并将污渍放在排水架上，使其风干（请勿使用吸水纸进行干燥）。

在显微镜下检查涂片

必须使用100X物镜和浸油。系统地扫描涂片并记录相关观察结果。

解释结果

从理论上讲，染成红色的微生物被认为是耐酸阳性（AAR +）的。

相反，如果微生物染成蓝色或绿色，则取决于用作抗染染料的染料，则将它们视为耐酸阴性（AAR-）。

参考文献

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